Klíčový rozdíl mezi HPLC s reverzní fází a HPLC s normální fází je ten, že HPLC s reverzní fází používá nepolární stacionární fázi a polární mobilní fázi, zatímco HPLC s normální fází používá polární stacionární fázi a méně polární mobilní fázi.
HPLC s normální fází je nejstarší technikou HPLC, kterou Tswett používal při separacích rostlinných extraktů; používal křídu ve skleněném sloupu. Toto byl klasický způsob chromatografie, který vedl k jeho pojmenování jako „normální“technika. HPLC s reverzní fází je na druhé straně opakem normální techniky, kterou vědci vyvinuli v poslední době.
Co je HPLC s reverzní fází?
HPLC s reverzní fází je chromatografická technika, ve které používáme hydrofobní stacionární fázi. Mezi všemi metodami HPLC využíváme tuto metodu přibližně ze 70 % kvůli její široké použitelnosti a reprodukovatelnosti. Stacionární fáze je nepolární a mobilní fáze je polární.
Většinou vědci používají jako mobilní fázi vodnou směs vody s mísitelným polárním organickým rozpouštědlem, jako je acetonitril nebo metanol. Proto analyty interagují s nepolární stacionární fází.
Co je normální fáze HPLC?
HPLC s normální fází je chromatografická technika, ve které používáme hydrofilní stacionární fázi. Je to tradiční metoda HPLC, i když ji tolik nepoužíváme. Stacionární fáze je polární a mobilní fáze je nepolární. Ještě důležitější je, že mobilní fáze této techniky je 100% organická. To znamená, že se k tomu nepoužívá žádná voda.
Obrázek 01: Profil vzorku pro HPLC chromatogramy na normální fázi a na reverzní fázi podle polarity složek v analytu.
Stacionární fáze obvykle obsahuje oxid křemičitý, kyano, diol, amino vázané fáze atd. Mobilní fáze zahrnují organická rozpouštědla, jako je hexan, ethylacetát atd. Tato technika je založena na zadržení molekul rozpouštědla nebo analytu na polární stacionární fáze.
Jaký je rozdíl mezi HPLC s reverzní fází a normální fází HPLC?
HPLC s reverzní fází je chromatografická technika, ve které používáme hydrofobní stacionární fázi. Stacionární fáze této techniky je nepolární, zatímco mobilní fáze je polární. Kromě toho vědci používají jako mobilní fázi v HPLC s reverzní fází vodnou směs vody s mísitelným polárním organickým rozpouštědlem, jako je acetonitril nebo methanol. Naproti tomu HPLC s normální fází je chromatografická technika, ve které používáme hydrofilní stacionární fázi. Stacionární fáze této techniky je polární, zatímco mobilní fáze je nepolární. Kromě toho vědci používají organická rozpouštědla jako hexan, ethylacetát atd. jako mobilní fázi HPLC s normální fází. Níže uvedená infografika představuje rozdíl mezi HPLC s reverzní fází a HPLC s normální fází v tabulkové formě.
Shrnutí – reverzní fáze versus normální fáze HPLC
Techniky HPLC s reverzní fází a normální fáze HPLC jsou dvě techniky kapalinové chromatografie. Klíčový rozdíl mezi HPLC s reverzní fází a HPLC s normální fází je ten, že HPLC s reverzní fází používá nepolární stacionární fázi a polární mobilní fázi, zatímco HPLC s normální fází používá polární stacionární fázi a méně polární mobilní fázi.
