Klíčový rozdíl mezi izokratickou a gradientovou elucí je ten, že izokratická eluce se týká udržování konstantní koncentrace v mobilní fázi, zatímco gradientová eluce se týká udržování proměnlivé koncentrace v mobilní fázi.
Pojmy izokratická a gradientová eluce se používají v chromatografii. Při chromatografickém běhu používáme stacionární fázi, což je nepohyblivá látka, spolu s mobilní fází, pohyblivou látkou. Izokratická a gradientová eluce popisuje vlastnosti mobilní fáze.
Co je izokratická eluce?
Izokratická eluce je termín používaný v chromatografii, když má mobilní fáze konstantní koncentraci. Zde je koncentrace mobilní fáze konstantní po celou dobu chromatografického procesu. V tomto procesu můžeme na chromatogramu pozorovat lineárně rostoucí šířku píku s retenčním časem. To však vede k nevýhodě – pozdně eluující píky pro pozdní eluci jsou velmi ploché a široké. Proto je obtížné tyto široké vrcholy rozpoznat jako vrcholy.
Při izokratické eluci se navíc selektivita nemění podle rozměrů kolony. To znamená, že selektivita nezávisí na změnách rozměrů sloupců. Zde se délka a průměr považují za rozměry sloupu. Proto se píky eluují ve stejném pořadí.
Co je gradientní eluce?
Gradientní eluce je termín používaný v chromatografii, kdy zde má mobilní fáze různou koncentraci. Jinými slovy, koncentrace mobilní fáze nemusí zůstat konstantní. Například v HPLC používá běžná separační metoda zpočátku 10% methanol a končí na 90% postupným zvyšováním koncentrace. Mobilní fáze má dvě složky: slabé rozpouštědlo a silné rozpouštědlo. Slabé rozpouštědlo umožňuje pomalou eluci solutu, zatímco silné rozpouštědlo způsobuje rychlou eluci solutu. V chromatografii na reverzní fázi používáme vodu jako slabé rozpouštědlo a organické rozpouštědlo jako silné rozpouštědlo.
Obrázek 01: HPLC
Metoda gradientové eluce navíc snižuje později eluované složky, aby se rychleji vymývaly, což poskytuje úzký pík v chromatogramu. Tato metoda zlepšuje tvar píku a také výšku píku. Navíc u techniky gradientové eluce se pořadí eluce mění se změnami rozměrů kolony.
Jaký je rozdíl mezi izokratickou a gradientovou elucí?
Pojmy izokratická a gradientová eluce se používají v chromatografii. Izokratická a gradientová eluce popisují vlastnosti mobilní fáze. Klíčový rozdíl mezi izokratickou a gradientovou elucí je ten, že izokratická eluce se týká udržování konstantní koncentrace v mobilní fázi, zatímco gradientová eluce se týká udržování proměnlivé koncentrace v mobilní fázi.
Při izokratické eluční technice se šířka píku zvyšuje s retenčním časem lineárně. Avšak v technice gradientové eluce je retence později eluovaných složek snížena, takže eluce je rychlejší a poskytuje úzké píky. Kromě toho u izokratické eluce nezávisí selektivita na rozměrech kolony, ale u gradientové eluce se selektivita mění s měnícími se rozměry kolony.
Následující tabulka shrnuje rozdíl mezi izokratickou a gradientovou elucí.
Shrnutí – izokratická vs gradientová eluce
Izokratická eluce a gradientová eluce popisují vlastnosti mobilní fáze. Klíčový rozdíl mezi izokratickou a gradientovou elucí je ten, že izokratická eluce se týká udržování konstantní koncentrace v mobilní fázi, zatímco gradientová eluce se týká udržování proměnlivé koncentrace v mobilní fázi.
