Klíčový rozdíl mezi diferenciální a hustotní gradientovou centrifugací je v tom, že diferenciální centrifugace odděluje částice ve směsi na základě velikosti částic, zatímco hustotní gradientová centrifugace odděluje částice ve směsi na základě hustoty částic.
Centrifugace je metoda separace různých složek ve směsi analytu. Tato metoda zahrnuje rotaci vzorku kolem pevné osy, což způsobuje produkci odstředivé síly. Odstředivá síla způsobuje, že částice ve vzorku se pohybují dolů skrz kapalné médium. Tento proces způsobuje sedimentaci částic nebo buněk s různou velikostí a hustotou různou rychlostí.
Co je diferenciální odstřeďování?
Diferenciální centrifugace je analytická technika, při které můžeme separovat částice ve směsi v závislosti na velikosti částice. Je to nejjednodušší forma odstřeďování a také nazývaná diferenciální peletování. Tato metoda je důležitá při oddělování složek v buňce. Částice, které mají různé velikosti, podléhají sedimentaci různými rychlostmi při odstřeďování. Jinými slovy, velké částice sedimentují rychleji než menší částice. Navíc lze rychlost sedimentace zvýšit zvýšením odstředivé síly.
Při zvažování jeho aplikací je diferenciální centrifugace užitečná při sklizni buněk nebo produkci hrubých subcelulárních frakcí z tkáňového homogenátu. Např. jaterní homogenát obsahuje jádra, mitochondrie, lysozomy a membránové vezikuly. Pokud tento homogenát odstředíme při nízké rychlosti a krátkou dobu, můžeme získat velká jádra jako peletu. Pokud použijeme vysokou odstředivou sílu, pak můžeme do pelety dostat mitochondrie. Biologické vzorky jsou však vždy náchylné ke kontaminaci.
Co je to centrifugace s gradientem hustoty?
Odstřeďování s hustotním gradientem je analytická technika, při které můžeme separovat částice ve směsi analytu na základě hustoty částice. Při této metodě se látky koncentrují v roztoku cesných solí nebo v sacharóze. Způsob zahrnuje frakcionaci částic na základě hustoty vztlaku. Hustotní gradient v této metodě je médium cesná sůl nebo sacharóza. Existují dva typy centrifugace s hustotním gradientem: rychlostní zonla centrifugace a isopyknická centrifugace.
Odstřeďování v rychlostních zónách zahrnuje separační médium, které má vrstvenou strukturu s úzkou zónou na vrcholu hustotního gradientu. V tomto procesu mají částice tendenci se pohybovat různými rychlostmi pod odstředivou silou v závislosti na hustotě částic. Obvykle všechny částice produkují pelety, protože hustota částic je vyšší než gradient hustoty.
Izopyknická centrifugace je druhým typem metody centrifugace s hustotním gradientem. Začíná se s homogenním roztokem. Pod odstředivou silou se částice ve směsi analytu pohybují, dokud hustota částic není podobná gradientu hustoty. Proto můžeme tuto techniku pojmenovat také jako rovnovážnou centrifugaci.
Jaký je rozdíl mezi diferenciální centrifugací a centrifugací s gradientem hustoty?
Diferenční a hustotní gradientová centrifugace jsou dva typy centrifugačních procesů, které se podílejí na separaci složek ve směsi analytu. Klíčový rozdíl mezi diferenciální a hustotní gradientovou centrifugací je v tom, že diferenciální centrifugace odděluje částice ve směsi na základě velikosti částic, zatímco hustotní gradientová centrifugace odděluje částice ve směsi na základě hustoty částic.
Níže uvedená infografika uvádí další rozdíly mezi diferenciální a hustotní gradientovou centrifugací.
Shrnutí – Centrifugace s diferenciálním vs. hustotním gradientem
Diferenční a hustotní gradientová centrifugace jsou dva typy centrifugačních procesů, které se podílejí na separaci složek ve směsi analytu. Klíčový rozdíl mezi diferenciální a hustotní gradientovou centrifugací je v tom, že diferenciální centrifugace odděluje částice ve směsi na základě velikosti částic, zatímco hustotní gradientová centrifugace odděluje částice ve směsi na základě hustoty částic.
