Klíčový rozdíl – HPLC vs LCMS
Před analýzou rozdílu mezi HPLC a LCMS se nejprve podívejme na význam HPLC a LCMS. Chromatografie je separační technika v chemické analýze, kde se složky vzorku oddělují během průchodu chromatografickým médiem. Zahrnuje také interakci se vzorkem, stacionární fází a mobilní fází. HPLC je zkratka pro High Performance Liquid Chromatography a používá se jako metoda kapalinové chromatografie v analytické chemii. Kombinace kapalinové chromatografie a hmotnostní spektroskopie (LCMS) byla vyvinuta pro kvantitativní analýzu vybraných biomolekul a jedná se o vysoce citlivý, přesný a specifický testovací postup ve srovnání s HPLC. Toto je klíčový rozdíl mezi HPLC a LCMC. Tento článek vám představí HPLC a LCMC, které se zabývají chemickou analýzou a proberou rozdíly mezi HPLC a LCMS.
Co je to HPLC?
Vysoce účinná kapalinová chromatografie (HPLC) je oblíbená separační technika v analytické chemii. Používá se hlavně k oddělení složek, k identifikaci a kvantifikaci každé složky ve směsi. Dříve byla tato metoda známá jako vysokotlaká kapalinová chromatografie, protože závisela na čerpadlech, aby proudila stlačené kapalné rozpouštědlo obsahující směs vzorku přes kolonu naplněnou pevným adsorpčním materiálem. Každá složka ve směsi vzorku interaguje s pevným adsorpčním materiálem odlišně, což má za následek různé průtoky pro různé složky. To může vést k oddělení složek, když vytékají z HPLC kolony.
HPLC se používá pro různé aplikace, jako je analýza hladin vitaminu D v krvi, užívání nelegálních drog sportovci detekcí zbytků drog v moči, třídění složek komplexního biologického vzorku pro výzkumné účely a analýzy a výroba léčiv.
Co je LCMS?
Kapalinová chromatografie – hmotnostní spektrometrie (LCMS) je analytická technika, která kombinuje fyzikální separační schopnosti kapalinové chromatografie se schopnostmi hmotnostní analýzy hmotnostní spektrometrie (MS). Kapalinová chromatografie je separační technika a hmotnostní spektrometrie se používá k analýze poměru hmotnosti k náboji nabitých částic. Fyzikální separace se obvykle dosahuje pomocí HPLC a alternativně LCMS také známé jako HPLC-MS. LCMS je dominantní analytická technika, která má ve srovnání s HPLC velmi vysokou přesnost, citlivost a specificitu. Je tedy užitečný v mnoha aplikacích, jako jsou výzkumné účely, analýza léčiv, analýza potravin atd. LCMS se používá hlavně k separaci, detekci, identifikaci a kvantifikaci biochemických vlastností konkrétního vzorku v přítomnosti složitých chemických směsí.
Jaký je rozdíl mezi HPLC a LCMC?
Akronym a definice HPLC a LCMC
HPLC: HPLC znamená High-Performance Liquid Chromatography. Je to separační technika, která se používá hlavně k oddělení složek, k identifikaci a kvantifikaci každé složky ve směsi.
LCMS: LCMS znamená Liquid Chromatography and Mass Spectrometry. Jedná se o analytickou techniku, která kombinuje fyzikální separační schopnosti kapalinové chromatografie se schopnostmi hmotnostní analýzy hmotnostní spektrometrie (MS).
Charakteristiky HPLC a LCMC
Klasifikace
HPLC: Toto je pouze metoda kapalinové chromatografie.
LCMS: Jedná se o kombinaci metody kapalinové chromatografie a metody hmotnostní spektrometrie.
Efektivita
HPLC: Ve srovnání s LCMS je analýza HPLC méně účinná a pomalejší.
LCMS: Ve srovnání s HPLC je analýza LCMS efektivní a rychlejší.
Citlivost
HPLC: Ve srovnání s LCMS je analýza HPLC méně citlivá.
LCMS: Ve srovnání s HPLC je LCMS analýza citlivější.
Specificita
HPLC: Ve srovnání s LCMS je analýza HPLC méně specifická.
LCMS: Ve srovnání s HPLC je LCMS analýza specifičtější.
Přesnost
HPLC: HPLC poskytuje méně přesné výsledky než LCMS pro stanovení některých chemikálií.
LCMS: LCMS poskytuje přesnější výsledky než HPLC pro stanovení některých chemikálií.
Component
HPLC: HPLC lze považovat za součást LCMS.
LCMS: LCMS nelze považovat za součást HPLC.
Zdroj iontů
HPLC: Iontový zdroj v přístroji HPLC neexistuje.
LCMS: V přístroji LCMS je přítomen iontový zdroj.
Aplikace
HPLC: Ionty, polymery, organické molekuly a biomolekuly lze analyzovat pomocí HPLC.
LCMS: Lze analyzovat organické molekuly a biomolekuly. Na rozdíl od HPLC lze LCMS použít ke zkoumání neúplně rozpuštěných směsí.
Operace
HPLC: Schéma přístroje HPLC je uvedeno na obrázku 1 a obvykle obsahuje autosampler, čerpadla a detektor. Vzorkovač zavede směs vzorku do mobilní fáze (stlačená směs rozpouštědel, jako je voda, acetonitril a/nebo methanol), která ji přenese do kolony. Čerpadla dodávají požadovaný průtok a složení mobilní fáze přes kolonu. Kolona je naplněna adsorbentem, což jsou zrnité pevné částice, jako je oxid křemičitý nebo polymery. Detektor vytváří signál úměrný množství složky vzorku přítomnosti v koloně, což umožňuje kvantifikovatelnou analýzu vybraných složek vzorku. Přístroj HPLC je řízen a analýzu dat zajišťuje digitální mikroprocesor a uživatelský software.
Obrázek 1: Schéma přístroje HPLC
LCMS: Schéma přístroje LCMS je uvedeno na obrázku 2. Extrakt vzorku se vloží do kolony sestávající z HPLC. Tento sloupec uchovává metabolity vzorku na základě fyzikálních vlastností a různé metabolity proudí do hmotnostního spektrometru v různých časových intervalech. Hmotnostní spektroskopie se používá pro hodnocení hmotností částic, pro stanovení elementárního uspořádání molekuly a pro objasnění struktur molekul. Vzorek by však měl být ionizován, aby se vytvořily nabité molekuly, aby se určil jejich poměr hmotnosti k náboji. Namísto HPLC přístrojů se tedy LCMS skládá z dalších tří modulů, jako je zdroj železa, hmotnostní analyzátor a detektor. Iontový zdroj může transformovat vzorek plynné fáze na ionty a hmotnostní analyzátor seskupuje ionty podle jejich hmotnosti pomocí elektromagnetických polí. Nakonec detektor kvantifikuje hodnoty a dodá údaje o každém iontu přítomném ve vzorku. Techniku LCMS lze použít pro kvalitativní i kvantitativní aplikace.
Obrázek 2: Schéma přístroje LCMS
Na závěr, HPLC je metoda kapalinové chromatografie, zatímco LCMS je kombinací kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Obě tyto analytické techniky mají různé charakteristiky, ale lze je použít k identifikaci a kvantifikaci složení potravin, léčiv a dalších bioaktivních molekul.
