Klíčový rozdíl mezi FPLC a HPLC je v tom, že FPLC je typ kapalinové chromatografie, která čistí velké biomolekuly, jako jsou proteiny, nukleotidy a peptidy, zatímco HPLC je typ kapalinové chromatografie, která odděluje sloučeniny s malou molekulovou hmotností.
Kapalinová chromatografie je technika používaná k rozdělení vzorku na jeho jednotlivé složky. K této separaci dochází v důsledku interakce specifických vzorků s mobilní a stacionární fází. Složky ve vzorku jsou odděleny na základě afinity každé složky k mobilní fázi v kapalinové chromatografii. Když mobilní fáze a vzorek procházejí kolonou, složky vzorku se začnou oddělovat do pásů, které lze detekovat UV-VIS spektroskopií. Proto jsou FPLC a HPLC dva typy technik kapalinové chromatografie.
Co je FPLC?
FPLC je typ kapalinové chromatografie, která čistí velké biomolekuly, jako jsou proteiny, nukleotidy a peptidy. Rychlá proteinová kapalinová chromatografie (FPLC) byla poprvé vyvinuta a uvedena na trh ve Švédsku společností Pharmacia v roce 1982. Často se používá k analýze nebo čištění proteinových směsí. To probíhá na principu afinity složek vzorku k pohybující se tekutině (mobilní fáze) a poréznímu pevnému materiálu (stacionární fáze). Ve FPLC je mobilní fází pufr a stacionární fáze je pryskyřice složená z kuliček. Obvykle se skládá ze zesíťované agarózy naplněné do válcové skleněné nebo plastové kolony.
Obrázek 01: Zařízení FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Ve většině strategií FLPC se používá iontoměnič. Proto se sledovaný protein bude vázat na pryskyřici prostřednictvím nábojové interakce. Technika FLPC také používá dva pufry: pufr 1 (probíhající pufr) a pufr 2 (eluční pufr). Zpočátku, když pufr a směs vzorku prochází kolonou, protein, který je středem zájmu ve směsi, se naváže na pryskyřici prostřednictvím nábojové interakce. Ale sledovaný protein se disociuje a vrací se do roztoku v elučním pufru, když eluční pufr prochází kolonou na konci procesu. Později roztok (eluent, který obsahuje sledovaný protein) prochází dvěma detektory, které měří koncentraci soli a koncentraci proteinu. Když je každý protein eluován, objeví se během detekce jako „vrchol“a může být shromážděn pro další použití.
Co je to HPLC?
HPLC je typ kapalinové chromatografie, která odděluje sloučeniny s nízkou molekulovou hmotností. V roce 1969 byla první HPLC komerčně vyrobena společností Waters Corporation, USA. Při vysokoúčinné kapalinové chromatografii (HPLC) se směs vzorku (analyt) v rozpouštědle (mobilní fáze) čerpá za vysokého tlaku přes kolonu s chromatografickou náplní (stacionární fáze). Směs vzorku je nesena pohybujícím se proudem nosného plynu helia nebo dusíku.
Obrázek 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Složky ve směsi vzorku, které mají nejmenší míru interakce se stacionární fází nebo největší míru interakce s mobilní fází, opustí kolonu rychleji. Na druhou stranu složky ve směsi vzorku, které mají největší míru interakce se stacionární fází nebo nejmenší míru interakce s mobilní fází, budou opouštět kolonu pomaleji. Na základě výše uvedeného principu interakce lze oddělit složky směsi vzorku. Detektor přístroje navíc identifikuje každou složku směsi vzorku, která opouští kolonu. HPLC se používá ke kontrole environmentálních a biologických vzorků na přítomnost nebo nepřítomnost známých sloučenin, jako jsou léky, toxiny nebo pesticidy. Používá se v různých průmyslových odvětvích, jako je farmaceutický, environmentální, forenzní a chemický.
Jaké jsou podobnosti mezi FPLC a HPLC?
- FPLC a HPLC jsou typy kapalinové chromatografie.
- Oba se používají k separaci a identifikaci biologických vzorků.
- Mají kapalnou mobilní fázi a pevnou stacionární fázi.
- Obě techniky používají k průchodu vzorkem kolonu.
- Tyto techniky používají čerpadla, detektory, ventily a software pro separaci a detekci vzorků.
Jaký je rozdíl mezi FPLC a HPLC?
FPLC je typ kapalinové chromatografie, která se používá k čištění velkých biomolekul, jako jsou proteiny, nukleotidy a peptidy. HPLC je typ kapalinové chromatografie, která se používá k separaci sloučenin s nízkou molekulovou hmotností. Toto je klíčový rozdíl mezi FPLC a HPLC. Kromě toho FPLC používá monitory pH a vodivosti a také sběrače frakcí. Naproti tomu HPLC nepoužívá monitory pH a vodivosti a sběrače frakcí.
Níže uvedená infografika uvádí další rozdíly mezi FPLC a HPLC v tabulkové formě.
Shrnutí – FPLC vs HPLC
Chromatografie je laboratorní analytická technika používaná pro separaci složek ze směsi. Dělí se na několik typů, jako je sloupcová chromatografie, plynová chromatografie, kapalinová chromatografie, iontoměničová chromatografie atd. FPLC a HPLC jsou dva typy technik kapalinové chromatografie. FPLC je typ kapalinové chromatografie, která se používá k čištění velkých biomolekul, jako jsou proteiny, nukleotidy a peptidy. Na druhou stranu, HPLC je typ kapalinové chromatografie, která se používá k separaci sloučenin s nízkou molekulovou hmotností. Toto je shrnutí toho, jaký je rozdíl mezi FPLC a HPLC.
