Klíčový rozdíl – přímá vs nepřímá ELISA
Enzymová imunoanalýza (ELISA), známá také jako enzymová imunoanalýza, je sérologický test, který detekuje protilátky v krvi. Slouží jako diagnostický nástroj ke zjištění, zda byl pacient vystaven konkrétnímu typu viru nebo jinému infekčnímu agens (antigenu) a zda si tělo vytvořilo protilátky proti infekci. ELISA může také identifikovat minulé a současné infekce. Proto je ELISA často používána jako prescreeningový test lékaři před hloubkovou analýzou nemocí. Toto vyšetření lze provést v laboratoři odebráním vzorku krve od pacienta. Existují dva typy testu ELISA: přímá ELISA a nepřímá ELISA. Klíčový rozdíl mezi přímou a nepřímou ELISA je v tom, že nepřímá ELISA je citlivější a vyžaduje přidání sekundární protilátky, zatímco přímá ELISA je méně citlivá a používá pouze primární protilátku.
Co je přímá ELISA?
ELISA je diagnostický test na onemocnění prováděný k identifikaci přítomnosti konkrétních antigenů nebo protilátek v krvi. Provádí se jako deskový test. Využívá protilátky spojené se snadno analyzovatelnými enzymy. Přítomnost antigenů ve vzorku séra se váže se specifickými protilátkami spojenými s enzymy. V posledním kroku se přidá specifický substrát, aby reagoval s enzymem. Enzym převádí substrát na barevný nebo signál produkující produkt. Změna barvy v chemickém substrátu odhaluje přítomnost konkrétní protilátky ve vzorku séra. Přímý test ELISA používá pouze primární protilátku spojenou s enzymem. Po navázání na antigen rychle mění barvu, což ukazuje na přítomnost infekčního agens v krvi. Intenzita signálů je však slabší v přímé ELISA, protože epitopy jsou omezeny na vazbu antigenů. Proto je přímá ELISA méně citlivá ve srovnání s nepřímou ELISA.
Obrázek 01: Přímý test ELISA
Co je nepřímá ELISA?
ELISA lze provést pomocí dvou typů protilátek, jmenovitě; primární protilátka a sekundární protilátka. Nástroj nepřímé ELISA využívá oba typy protilátek k zesílení signálů pro lepší detekci. Technika nepřímé ELISA se provádí následovně.
- Destičky jsou inkubovány s antigeny a promyty, aby se zablokovala nespecifická vazba.
- Poté se přidají primární protilátky a promyjí se.
- Přidají se sekundární protilátky vázané na enzym a promyjí se.
- Přidá se substrát a nechá se reagovat s enzymy.
- Signály jsou detekovány a je identifikována přítomnost nebo nepřítomnost specifického antigenu ve vzorku.
V nepřímém testu ELISA se několik sekundárních protilátek může vázat na jednu primární protilátku. Sekundární protilátky jsou spojeny se snadno testovatelnými enzymy. Jedna vazba tedy může vytvořit silný signál díky více než jedné interakci. Nepřímá ELISA je tedy citlivější než přímá ELISA. Nepřímá ELISA však může vytvářet nespecifické signály v důsledku zkřížených reakcí sekundárních protilátek.
Obrázek 02: Nepřímý test ELISA
Jaký je rozdíl mezi přímou a nepřímou ELISA?
Přímá vs nepřímá ELISA |
|
| Přímá ELISA je méně citlivá ve srovnání s nepřímou ELISA. | Nepřímá ELISA je citlivější. |
| Zabraný čas | |
| Přímý test ELISA je rychlý proces. | Nepřímá ELISA je časově náročná. |
| Užití protilátek | |
| V přímé ELISA se používá pouze jeden typ protilátek (primární protilátky). | Primární a sekundární protilátky se používají pro nepřímou ELISA. |
| Propojení s enzymy | |
| Primární protilátky jsou spojeny s enzymy. | Sekundární protilátky jsou spojeny s enzymy. |
| Zkřížená reaktivita druhých protilátek | |
| Přímá ELISA eliminuje zkříženou reaktivitu druhých protilátek. | Nepřímá ELISA je ovlivněna zkříženou reaktivitou druhých protilátek. |
| Signály | |
| Signály jsou slabé ve srovnání s nepřímým testem ELISA. | V nepřímé ELISA jsou signály zesíleny. Proto je snadné jej odhalit. |
Shrnutí – přímá vs nepřímá ELISA
ELISA je biochemická technika používaná především v imunologii k detekci přítomnosti protilátky nebo antigenu ve vzorku krve pacienta. Může být provedena dvěma procesy známými jako přímá nebo nepřímá ELISA. Přímý test ELISA používá k detekci antigenu pouze primární protilátky, zatímco nepřímý test ELISA používá primární i sekundární protilátky. V přímé ELISA jsou značeny primární protilátky, zatímco v nepřímé ELISA jsou značeny sekundární protilátky. Toto je rozdíl mezi přímou a nepřímou ELISA.
