Klíčový rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí je v tom, že přímá imunofluorescence používá jedinou protilátku, která působí proti cíli zájmu, zatímco nepřímá imunofluorescence používá dvě protilátky k označení cíle zájmu.
Imunofluorescence neboli buněčné zobrazování je technika, která se používá k označení specifického cílového antigenu fluoroforem. Zde je fluorofor fluorescenční chemická sloučenina, která může po excitaci světlem znovu emitovat světlo. Když se fluorofor naváže na cílový antigen, umožňuje detekci cílové molekuly ve vzorku. Abychom to dále popsali, když se antigen váže se specifickou protilátkou, může být konjugován s fluorofory. Proto je snadné detekovat přítomnost cílového antigenu ve vzorku při pozorování pod fluorescenčním mikroskopem.
Kromě toho existují dva typy imunofluorescence; přímá a nepřímá imunofluorescence. Rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí spočívá především v počtu použitých protilátek a konjugaci s fluoroforem. To znamená, že při přímé imunofluorescenci se fluorofor přímo konjuguje s primární protilátkou, zatímco při nepřímé imunofluorescenci se fluorofor konjuguje se sekundární protilátkou.
Co je přímá imunofluorescence?
Imunofluorescence využívá protilátky k detekci specifických cílových antigenů. Přímá imunofluorescence je jedním ze dvou typů imunofluorescence. V přímé imunofluorescenci se účastní jedna protilátka (primární protilátka) a fluorofor se přímo konjuguje s primární protilátkou. Po navázání protilátky s cílovým antigenem fluorofor emituje fluorescenci, kterou lze detekovat fluorescenčním mikroskopem.
Obrázek 01: Přímá imunofluorescence
Přímá imunofluorescence je však nákladná metoda, protože primární konjugované protilátky jsou ve srovnání se sekundárními protilátkami nákladné. Nicméně nezahrnuje další krok, tedy kratší techniku. Kromě toho jsou nespecifické vazby redukovány v přímé imunofluorescenci. Druhová zkřížená reaktivita je tedy nízká. Ale při detekci je citlivost přímé imunofluorescence ve srovnání s nepřímou imunofluorescencí slabá.
Co je nepřímá imunofluorescence?
Nepřímá imunofluorescence je druhý typ imunofluorescence, který zahrnuje dva typy protilátek, jako jsou primární a sekundární protilátky, při značení cílového antigenu. Při této metodě se fluorofor konjuguje se sekundární protilátkou. Tato technika tedy zahrnuje další krok.
Obrázek 02: Imunofluorescence
Citlivost této metody je však vysoká, protože několik fluoroforů lze konjugovat se sekundárními protilátkami, což usnadňuje detekci. Kromě toho je nepřímá imunofluorescence méně nákladná kvůli skutečnosti, že konjugace sekundárních protilátek je levnější a jednodušší. Ve srovnání s přímou imunofluorescencí je druhová zkřížená reaktivita u nepřímé metody vysoká.
Jaké jsou podobnosti mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí?
- Jsou to dva typy imunofluorescenční techniky.
- Primární protilátky a fluorofor zahrnují obě metody.
- Reakce antigen-protilátka se vyskytuje u obou metod.
- Přímá i nepřímá imunofluorescence navíc využívají k detekci antigenu fluorescenční mikroskop.
Jaký je rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí?
Imunofluorescence může být přímá nebo nepřímá na základě konjugace fluoroforu s použitými protilátkami. Při přímé imunofluorescenci se fluorofor konjuguje s primární protilátkou, což je jediná protilátka, která se účastní této techniky. Na rozdíl od toho se při nepřímé imunofluorescenci fluorofor konjuguje se sekundární protilátkou, což je jeden ze dvou typů protilátek, které se účastní techniky. Hlavním rozdílem mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí je tedy typ protilátky, která se konjuguje s fluoroforem.
Následující infografika poskytuje vedle sebe srovnání rozdílu mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí.
Shrnutí – přímá vs nepřímá imunofluorescence
Imunofluorescence je technika, která se používá k detekci přítomnosti specifických antigenů ve vzorku. Tato technika využívá specifické protilátky. Proto se v tomto případě protilátky konjugují s fluorofory, aby je detekovaly pomocí fluorescenčního mikroskopu. Kromě toho existují dva typy imunofluorescence, a to přímá a nepřímá imunofluorescence. Přímá imunofluorescence zahrnuje jedinou protilátku a fluorofor přímo konjugovaný s touto protilátkou. Nepřímá imunofluorescence zahrnuje dvě protilátky; primární a sekundární a fluorofor konjugovaný se sekundární protilátkou. Protože několik sekundárních protilátek se může vázat na primární protilátku a několik fluoroforů se může konjugovat se sekundárními protilátkami, je nepřímá imunofluorescence citlivější metodou než přímá metoda. Kromě toho je nepřímá metoda levnější než přímá metoda. To je tedy rozdíl mezi přímou a nepřímou imunofluorescencí.
