Klíčový rozdíl mezi kompetitivní a nekompetitivní ELISA je v tom, že kompetitivní ELISA používá inhibiční antigen, zatímco nekompetitivní ELISA nepoužívá inhibiční antigen pro analýzu.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) je imunologický test, který detekuje různé cíle, jako jsou protilátky, antigeny, proteiny a glykoproteiny. Je to rychlý a jednoduchý způsob provedení. Proto se častěji používá pro výzkumné a diagnostické účely. ELISA zahrnuje použití enzymů a specifickou vazbu protilátky a antigenu. Na základě toho, jak reakce probíhají, existují čtyři typy ELISA: přímá ELISA, nepřímá ELISA, sendvičová ELISA a inhibiční ELISA. Přímá, nepřímá a sendvičová ELISA jsou typy nekompetitivní ELISA, zatímco inhibiční ELISA je typem komplementární ELISA. Hlavním cílem tohoto článku je diskutovat o rozdílu mezi kompetitivní a nekonkurenční ELISA.
Co je kompetitivní ELISA?
Konkurenční ELISA měří koncentraci antigenu ve vzorku prostřednictvím detekce interference signálu. Zde test používá inhibitorový antigen. Jedná se tedy o typ inhibiční ELISA. Během tohoto postupu antigeny přítomné ve vzorku soutěží s vybraným referenčním antigenem o vazbu na specifické množství značené protilátky. Kromě toho tento postup začíná inkubací vzorku s přebytečným množstvím značené protilátky. Referenční antigen by měl být také předem potažen na testovací destičce s více jamkami. Poté by měla být směs vzorků přidána na testovací destičku, která obsahuje referenční antigen. Volné protilátky se navážou na referenční antigen v závislosti na množství antigenu ve vzorku. Pokud je tedy přítomno více antigenu vzorku, bude detekováno méně referenčního antigenu. Vytváří tak slabší signál.
Obrázek 01: ELISA
Naproti tomu, když vzorek obsahuje menší množství antigenu, více a více referenčního antigenu obsadí protilátky a poskytne silný signál. Vzhledem k tomu, že kompetitivní ELISA poskytuje silnější signál, když vzorek obsahuje malé množství antigenů, je kompetitivní ELISA velmi citlivý test, a to i pro vzorky s malým počtem antigenů.
V některých konkurenčních soupravách ELISA se místo značené protilátky používá značený antigen. Zde budou značený antigen a antigen vzorku soutěžit o vazbu na primární protilátku. Podobně, když je množství antigenu ve vzorku nízké, množství značeného antigenu, který se váže na protilátky, bude vyšší a vytvoří silnější signál.
Co je nekompetitivní ELISA?
Mezi čtyřmi typy ELISA jsou tři typy nekompetitivní ELISA. Jsou to přímá ELISA, nepřímá ELISA a sendvičová ELISA. Všechny tři formáty pracují na společném principu ELISA s drobnými rozdíly v jejich metodologii.
Přímý test ELISA používá primární protilátku značenou enzymem. Proto nevyžaduje sekundární protilátku. Proto je přímá ELISA rychlejší než jiné typy ELISA. Primární protilátka se bude přímo vázat na imobilizovaný cílový antigen, který je přítomen v destičce. Proto dojde k reakci enzym-substrát, která vytvoří viditelný signál.
Obrázek 02: Sendvičová ELISA
Na rozdíl od přímé ELISA využívá nepřímá ELISA neznačenou primární protilátku a enzymem značenou sekundární protilátku. Jakmile se primární protilátka naváže na imobilizovaný antigen, sekundární protilátka se naváže na primární protilátku. Enzym v sekundární protilátce bude reagovat s antigenem a vytvoří viditelný signál. Sendvičová ELISA se liší od přímé i nepřímé ELISA. Zde je protilátka imobilizována na stěně testovací destičky.
Jaké jsou podobnosti mezi kompetitivní a nekompetitivní ELISA?
- Konkurenční a nekompetitivní ELISA jsou dva typy technik imunosorbentních testů.
- Jsou to vysoce flexibilní a citlivé techniky.
- Kromě toho, jak kompetitivní, tak nekompetitivní ELISA jsou enzymatické imunotesty.
- Obě metody také generují signál díky reakci enzym-substrát.
Jaký je rozdíl mezi kompetitivní a nekompetitivní ELISA?
Konkurenční ELISA je typ ELISA, který spoléhá na kompletaci mezi antigenem analytu a značeným antigenem pro omezené množství specifické protilátky. Na druhé straně žádná taková kompetice mezi požadovaným antigenem a referenčním antigenem v nekompetitivní ELISA neexistuje. Toto je klíčový rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA. Podobně kompetitivní ELISA je inhibiční ELISA, zatímco nekompetitivní ELISA není inhibiční ELISA. To je také rozdíl mezi kompetitivní a nekonkurenční ELISA.
Kromě toho je kompetitivní ELISA vhodnější pro měření malého množství požadovaného antigenu. Je to citlivá metoda. Na druhé straně nekompetitivní ELISA nezávisí na počtu antigenů přítomných ve vzorku. Proto je to také rozdíl mezi kompetitivní a nekonkurenční ELISA.
Níže uvedená infografika vysvětluje rozdíl mezi kompetitivní a nekonkurenční ELISA srovnatelně.
Shrnutí – Konkurenční versus nekonkurenční ELISA
Konkurenční a nekompetitivní ELISA jsou dva hlavní typy ELISA neboli enzymatických imunosorbentních testů. Při shrnutí rozdílu mezi kompetitivní a nekompetitivní ELISA, kompetitivní ELISA spoléhá na kompetici mezi zájmovým antigenem a referenčním antigenem vůči omezenému množství protilátek. Proto se kompetitivní ELISA také nazývá inhibiční ELISA. Na druhé straně nekompetitivní ELISA nespoléhá na kompetici mezi cílovými antigeny a referenčními antigeny. Využívá nadbytek značené specifické protilátky vůči sledovanému analytu. Toto je klíčový rozdíl mezi konkurenční a nekompetitivní ELISA. Přímá ELISA, nepřímá ELISA a sendvičová ELISA jsou tři hlavní typy nekompetitivní ELISA.
