Transformace vs transfekce
Transformace a transfekce jsou dvě jednoduché techniky používané k zavedení cizího genu do hostitelské buňky. Tyto techniky však závisí na typu hostitelského nebo vektorového systému.
Co je buněčná transformace?
Transformace je technika používaná k zavedení genů do buněk kvasinek a bakterií. Tato technika obvykle způsobuje dědičné změny v genech, a proto je exprese genu trvalá. Bakteriální transformaci poprvé představil v roce 1928 Frederick Griffith. Poté na počátku 70. let 20. století byla tato technika použita v E.coli. Během procesu transformace E. coli jsou buňky namočeny v ledově chladném roztoku CaCl2 Tento krok činí buňky E.coli kompetentními. Poté se kompetentní buňky smíchají s plasmidovou DNA a inkubují se na ledu po dobu 20-30 minut. Poté následuje krátký tepelný šok, aby se umožnil přenos DNA do buňky. Nakonec se buňky umístí do živného bujónu a inkubují se při 37 °C po dobu 60-90 minut, aby se vytvořily plazmidy. Jakmile jsou tyto kroky úspěšně dokončeny, transformované buňky mohou být umístěny na vhodné médium pro propagaci buněk. Protože je transformace považována za neefektivní techniku, nelze ji použít pro přípravu klonových bank.
Co je buněčná transfekce?
Transfekce je metoda zavedení cizího genu obvykle do savčích buněk. Existují dva způsoby transfekce; jmenovitě přechodná transfekce a stabilní transfekce. Při přechodné transfekci je genová exprese dostupná po omezenou dobu; tedy změna genu způsobí dočasnou expresi. Tato transfekční metoda je jednoduchá a rychlá; proto se dá běžně používat. Jednou z nevýhod přechodné transfekce je obtížnost použití pro systémy syntézy proteinů ve velkém měřítku.
Během stabilní transfekce je cílový gen integrován do genomu hostitelské buňky, a proto je genová exprese na rozdíl od přechodné transfekce trvalá.
Jaký je rozdíl mezi transformací a transfekcí?
• Transformace je zavedení genu do prokaryotické buňky (bakteriální a kvasinkové), zatímco transfekce se obvykle nazývá zavedení genu do savčí buňky.
• Transformace má za následek dědičné změny v genech, zatímco transfekce může mít za následek buď dočasnou expresi, nebo trvalé změny v genech.
