Klíčový rozdíl – imunocytochemie vs imunohistochemie
Imunocytochemie (ICC) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě široce používané techniky v molekulární diagnostice, které na základě molekulárních markerů přítomných na buňkách identifikují a potvrzují výskyt jak nepřenosných nemocí, tak nemocí přenosných. Klíčovým rozdílem imunocytochemie a imunohistochemie je molekula, která se v těchto technikách používá jako analytický postup. V ICC se používají primární a sekundární protilátky konjugované s markery, jako je fluorescence, zatímco pro diagnostická stanovení se používají IHC, monoklonální a polyklonální protilátky.
Co je imunocytochemie (ICC)?
ICC využívá primární a sekundární protilátky navázané na markery, jako jsou fluorescenční markery nebo enzymy, a je výkonnou detekční metodou k detekci antigenů přítomných na cílových buňkách, kterými mohou být buď infekční buněčné částice nebo rakovinné nádorové buňky. Pro imunocytochemii jsou vyžadovány tři typy kontrol.
- Primární protilátka – kontrola, která ukazuje specificitu vazby primární protilátky na antigen
- Sekundární protilátka – kontrola, která ukazuje, že označení je specifické pro primární protilátku
- Ovládací prvky štítku – ukazují, že označení je výsledkem přidaného štítku a nikoli výsledkem endogenního štítkování.
Obrázek 01: Imunocytochemie označuje jednotlivé proteiny v buňkách (zde je tyrosinhydroxyláza v axonech sympatických autonomních neuronů znázorněna zeleně).
Primární protilátková kontrola je specifická pro každou novou protilátku a nelze ji opakovat pro každý experiment. Sekundární protilátková kontrola je navržena na základě primární protilátky použité v experimentu a je součástí každého experimentu. Kontrola označování je zahrnuta, pokud se změní podmínka postupu, změní se vzorek nebo když je nalezeno neočekávané označení.
Dvě hlavní aplikace ICC jsou Radio Immuno – Assay (RIA) a Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Nejběžnější používanou protilátkou je imunoglobulin G.
Co je imunohistochemie (IHC)?
V imunohistochemii zdrojový vzorek obsahuje monoklonální a polyklonální protilátky za účelem stanovení přítomnosti antigenů v cizích buňkách. Tato technika je založena na specifické reakci vazby antigen-protilátka. Protilátky používané při detekci mohou být označeny různými markery; mohou to být fluorescenční markery, radioaktivně značené markery nebo chemické markery. Prostřednictvím usnadnění vazby in vitro mezi antigenem a cílovou protilátkou lze určit přítomnost nebo nepřítomnost konkrétního proteinu buňky.
Obrázek 02: Imunohistochemické barvení normální ledviny pomocí CD10
V současné době se vědci podílejí na vývoji cílových protilátek pro specifické antigeny přítomné v buňkách, které se mohou vyvinout buď jako maligní nádorové buňky, nebo jako antigeny přítomné v infekčních agens, jako je HIV.
Jaké jsou podobnosti mezi imunocytochemií a imunohistochemií?
- Reakce jsou vysoce specifické a přesné v ICC a IHC.
- Aplikace ICC a IHC zahrnují diagnostiku rakoviny a infekčních chorob.
- V obou podmínkách by měly být udržovány sterilní podmínky a měly by být prováděny in vitro
- Obě techniky poskytují reprodukovatelné výsledky.
- Oba jsou rychlé.
- Rádiové značení, fluorescenční techniky se používají jako detekční metody v ICC i IHC.
- Oba jsou založeny na párování antigen-protilátka.
Jaký je rozdíl mezi imunocytochemií a imunohistochemií?
Imunocytochemie (ICC) vs imunohistochemie (IHC) |
|
| ICC používá primární a sekundární markery vázané na protilátky, jako jsou fluorescenční markery nebo enzymy, a je výkonnou detekční metodou k detekci antigenů přítomných na cílových buňkách. | IHC je metoda, která využívá monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů, což jsou speciální proteinové markery umístěné na povrchu buněk. |
| Ukázkový zdroj | |
| Vzorky získané z tkání, které byly histologicky zpracovány na tenké řezy, se používají v ICC. | IHC používá vzorky sestávající z buněk pěstovaných v monovrstvě nebo buněk v suspenzi, které jsou uloženy na sklíčko. |
| Zpracování vzorku | |
| V ICC by buňky měly být propustné, aby se usnadnilo pronikání protilátek k intracelulárním cílům. | V IHC jsou buňky před barvením fixovány formalínem a zalité parafínem. |
Shrnutí – Imunocytochemie vs imunohistochemie
Molekulární diagnostika se používá k identifikaci a potvrzení výskytu jak nepřenosných nemocí, tak nemocí přenosných na základě molekulárních markerů přítomných na buňkách. Molekulární markery mohou být proteiny nebo sekvence DNA nebo RNA; vývoj technologií, jako je ICC a IHC, připravil vědcům cestu k identifikaci nemoci a její příčiny v rané fázi. ICC i IHC závisí na specifických reakcích mezi protilátkou a antigenem, ačkoliv zdroj vzorku. Hlavním rozdílem mezi imunocytochemií a imunohistochemií je zpracování vzorků těchto dvou postupů.
Stáhnout PDF verzi Imunocytochemie vs Imunohistochemie
Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro offline účely podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi imunocytochemií a imunohistochemií.
