Klíčový rozdíl – imunofluorescence vs imunohistochemie
Diagnostika nemocí, která využívá molekulárně biologické metody, se stala nově vznikající oblastí klinické laboratorní technologie. Zahrnuje všechny testy a metody k identifikaci onemocnění a pochopení příčiny onemocnění analýzou DNA, RNA nebo exprimovaných proteinů v organismu. Rychlý pokrok v molekulární diagnostice umožnil základní výzkum přenosných a nepřenosných nemocí. Ty se používají k určení změn v sekvencích nebo hladinách exprese v klíčových genech nebo proteinech zapojených do onemocnění. Imunofluorescence (IF) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě takové široce používané techniky v biologii rakoviny. IF je typ IHC, kde se k analýze monoklonálních a polyklonálních protilátek používá metoda fluorescenční detekce, zatímco IHC používá chemické metody k detekci monoklonálních a polyklonálních protilátek. Toto je klíčový rozdíl mezi IF a IHC.
Co je imunofluorescence (IF)?
Imunofluorescence je detekční technika, kde jsou protilátky použité v testu značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro účely detekce. Značené sekundární protilátky mohou vést k nežádoucím signálům pozadí; proto je technika IF v současnosti založena na značení samotné primární protilátky, aby se zabránilo nežádoucím signálům během detekce. Prostřednictvím této techniky je zabráněno nespecifické vazbě mezi primární a sekundární protilátkou a je rychlejší, protože není zapojen žádný sekundární inkubační krok. Zlepšila se také kvalita dat.
Obrázek 01: Dvojité imunofluorescenční barvení pro BrdU, NeuN a GFAP
Fluorochromy nebo fluorescenční barviva jsou sloučeniny, které mohou absorbovat záření, nejlépe ultrafialové záření, které je excitováno. Když částice dosáhnou základního stavu z excitovaného stavu, emitují záření, které je zachyceno a detekováno detektorem, aby vytvořilo spektrum. Je velmi důležité, aby fluorescenční značka byla kompatibilní a stabilní pro konkrétní reakci a měla by být správně konjugována s protilátkou, aby se získaly přesné výsledky. Jedním z nejpoužívanějších fluorochromů je fluorescein isothiokyanát (FITC), který je zelené barvy s absorpčními a emisními vrcholy vlnových délek 490 nm a 520 nm. Rhodamin, další činidlo používané v IF, je červené barvy a má výrazné absorpční a emisní vrcholové vlnové délky 553 nm a 627 nm.
Co je imunohistochemie (IHC)?
IHC je molekulární testovací metoda používaná za účelem identifikace a potvrzení přítomnosti antigenu v cílové buňce. Cílovou buňkou může být infekční částice, mikrobiální patogen nebo maligní nádorová buňka. IHC využívá monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů přítomných na buněčném povrchu cílových buněk. Technika je založena na vazbě antigen-protilátka. K těmto protilátkám je konjugován detekční marker, aby se detekovala přítomnost nebo nepřítomnost konkrétního antigenu. Tyto markery mohou být chemické markery, jako jsou enzymy, fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.
Obrázek 02: Řez myší-mozek obarvený imunohistochemií
Nejpopulárnější aplikace IHC je v biologii rakovinných buněk k identifikaci přítomnosti zhoubných nádorů, ale používá se také k detekci infekčních onemocnění.
Jaké jsou podobnosti mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?
- Imunofluorescence a imunohistochemie probíhají za podmínek in vitro.
- Obě techniky jsou založeny na antigen-protilátce
- Obě jsou velmi rychlé techniky.
- Výsledky technik jsou reprodukovatelné.
- Oba mají zlepšenou kvalitu dat.
- Tyto techniky používané v diagnostice rakoviny a infekčních chorob.
Jaký je rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií?
Imunofluorescence vs imunohistochemie |
|
| IF je detekční technika, kde jsou protilátky použité v testu značeny pomocí fluorescenčních barviv nebo fluorescenčních proteinů pro detekci. | IHC je detekční technika, kde jsou protilátky použité v testu značeny pomocí chemikálií nebo radioaktivních prvků pro detekci. |
| Přesnost | |
| Přesnost u techniky IF je vyšší než u IHC. | V IHC je přesnost nižší. |
| Specificita | |
| IF je konkrétnější. | IHC je méně konkrétní. |
Shrnutí – Imunofluorescence vs imunohistochemie
Molekulární mechanismy přinesly v oblasti medicíny mnoho změn a daly vzniknout pokročilým molekulárním testovacím metodám, které přinesly revoluci v oblasti diagnostiky. Tyto vynálezy vedly k rychlé a přesné identifikaci a potvrzení onemocnění, a tím umožnily úspěšné podávání a výrobu léků. Tyto techniky se také používají ve farmakologii za účelem nalezení cílů léčiv a potvrzení farmakokinetických vlastností léčiva během metabolismu léčiv. IF a IHC jsou dvě diagnostické metody, které jsou založeny na konceptu vazby antigenu a protilátky, i když se způsob detekce v obou technikách liší. IF využívá princip fluorescence k detekci antigenu a IHC používá k detekci antigenu koncept chemické konjugace. To je rozdíl mezi IF a IHC.
Stáhnout PDF verzi Immunofluorescence vs Imunohistochemistry
Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro offline účely podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi imunofluorescencí a imunohistochemií.
