Klíčový rozdíl – in situ hybridizace vs imunohistochemie
Diagnostika rakoviny a infekčních chorob je oblíbeným trendem, kde se nové techniky založené na proteomice a genomice využívají za účelem identifikace nádorů nebo infekčních buněk, jejich proliferace a míst vývoje buněk a analýzy genetického základu většiny přenosných a nepřenosné nemoci. Výsledkem bude přesné zpracování a navrhování léků a vývoj přizpůsobených terapií nemocí. In situ hybridizace (ISH) a imunohistochemie (IHC) jsou dvě takové široce používané techniky v biologii rakoviny a klíčový rozdíl mezi in situ hybridizací a imunochemií spočívá v molekulách, které se používají v postupu analýzy. U ISH se při analýze používají sondy nukleových kyselin, zatímco u IHC se pro diagnostická stanovení používají monoklonální a polyklonální protilátky.
Co je hybridizace in situ (ISH)?
In situ hybridizace je technika hybridizace nukleové kyseliny, která se přímo provádí na části nebo části tkáně, v celé tkáni nebo v buňkách. Technika závisí na teorii Watson Crickova komplementárního párování bází, jehož výsledkem jsou buď hybridy DNA-DNA nebo hybridy DNA-RNA, které mohou detekovat mutované geny nebo identifikovat požadovaný gen. Jednovláknové sekvence DNA, dvouvláknové sekvence DNA, jednovláknové sekvence RNA nebo syntetické oligonukleotidové sekvence se používají jako sondy během hybridizační techniky a tyto sondy jsou značeny radioaktivním fosforem na svém 5' konci pro identifikační postupy při autorradiografii nebo značeny pomocí fluorescenčních barviv.. K dispozici jsou různé typy technik ISH na základě typu použité sondy a typu použité vizualizační techniky.
Obrázek 01: Fluorescenční hybridizace in situ
Existuje mnoho aplikací ISH, zejména v molekulární diagnostice infekčních onemocnění za účelem identifikace přítomnosti patogenů a potvrzení patogenu pomocí molekulární diagnostiky. Používá se také v oblasti vývojové biologie, karyotypizace a fylogenetické analýzy a fyzického mapování chromozomů.
Co je imunohistochemie (IHC)?
V technice IHC je hlavní analyzovanou molekulou antigen. Během IHC se používají monoklonální a polyklonální protilátky k určení přítomnosti antigenů při infekci nebo stavu proliferace maligních buněk. Technika je založena na vazbě antigen-protilátka a pro tuto techniku se používají enzymové značky; jednou z takových aplikací je ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markery mohou být také fluorescenčně značené protilátky nebo radioaktivně značené protilátky.
Obrázek 02: Imunohistochemie
IHC je široce používán pro detekci rakovinných buněk. Diagnostické postupy se zaměřují na antigeny přítomné na nádorových buňkách k identifikaci a charakterizaci nádoru. Stejný postup se používá pro diagnostiku infekčních agens. Monoklonální a polyklonální protilátky se také používají k analýze různých genových produktů tím, že umožňují vazebnou reakci protilátka-antigen mezi požadovaným proteinem a podávanou syntetickou protilátkou.
Jaké jsou podobnosti mezi in situ hybridizací a imunohistochemií?
- ISH a IHC jsou vysoce specifické reakce.
- Obě techniky jsou vysoce přesné.
- Obě techniky lze použít v diagnostice rakoviny a infekčních onemocnění.
- Tyto techniky se provádějí ve sterilním prostředí in-vitro.
- Obě jsou rychlé techniky, které poskytují reprodukovatelné výsledky.
- ISH a IHC používají metody detekce, jako je rádiové značení a fluorescenční techniky.
Jaký je rozdíl mezi in situ hybridizací a imunohistochemií?
In situ hybridizace vs imunohistochemie |
|
| ISH je technika hybridizace nukleové kyseliny, která se provádí přímo na části nebo části tkáně nebo na celé tkáni. | IHC je technika, při které se používají monoklonální a polyklonální protilátky ke stanovení přítomnosti antigenů, což jsou speciální proteinové markery umístěné na povrchu buněk. |
| Typ analyzovaných biologických molekul | |
| ISH analyzuje nukleové kyseliny. | IHC analyzuje proteiny-antigeny. |
| Základ biochemické reakce | |
| Při této technice dochází ke komplementárnímu párování bází mezi DNA-DNA nebo DNA-RNA. | Interakce antigen-protilátka se účastní imunohistochemie. |
| Metody detekce související s enzymem | |
| Metody detekce spojené s enzymy nelze v ISH použít. | V IHC lze použít metody detekce spojené s enzymy. |
Shrnutí – In situ hybridizace vs imunohistochemie
Molekulární diagnostika jsou rychlé a potvrzovací metody, které lze použít k identifikaci nepřenosné nemoci, jako je rakovina nebo přenosné nemoci, jako je HIV nebo tuberkulóza, na základě molekulárních markerů přítomných na buňkách, které vedou k manifestaci nemoci. Molekulární markery mohou být přítomny ve formě exprimovaných proteinů nebo na genetické úrovni, na základě které jsou zaváděny různé nové techniky pro zvýšení účinnosti a jsou méně pracné, ačkoli s těmito technikami jsou spojeny vysoké náklady. ISH tedy závisí na tvorbě hybridu DNA-DNA nebo DNA-RNA a IHC závisí na specifických reakcích mezi protilátkou a antigenem. Toto je rozdíl mezi hybridizací in situ.
Stáhnout PDF verzi hybridizace in situ vs imunohistochemie
Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro offline účely podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi in situ hybridizací a imunohistochemií.
