Klíčový rozdíl – RPMI vs DMEM
Většina výzkumných studií zahrnuje kultivaci živočišných buněk, a proto tyto studie vyžadují udržování živočišných buněčných linií za speciálních růstových podmínek. Kultivace živočišných buněk se široce provádí ve farmakologických studiích k identifikaci metabolismu léčiv, v diagnostice onemocnění a ve výzkumu rakoviny. Buněčné kultivační médium je důležitým aspektem živočišné buněčné kultury. Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) a Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) jsou dvě kultivační média používaná při kultivaci živočišných buněk. RPMI je médium široce používané pro kultivaci savčích buněk v suspenzní kultuře. DMEM je modifikovaný typ bazálního média se zvýšenými koncentracemi aminokyselin a vitamínů až čtyřnásobně. DMEM se používá při kultivaci buněk v adherentních kulturách. Klíčovým rozdílem mezi těmito dvěma médii je typ kultury médií. RPMI se používá pro suspenzní kultury, zatímco DMEM se používá pro kultivaci adherentních buněk.
Co je RPMI?
RPMI nebo Roswell Park Memorial Institute Medium je také označováno jako RPMI 1640. Název média byl odvozen podle institutu, ve kterém bylo médium objeveno. Toto médium se běžně používá v kultuře živočišných buněk, zejména pro růst savčích buněk. Původně byly vyvinuty pro růst lidských lymfocytů.
V RPMI jsou zahrnuty následující ingredience.
- Glukóza
- indikátor pH (fenolová červeň)\
- Soli (chlorid sodný, hydrogenuhličitan sodný, fosforečnan sodný, chlorid draselný, síran hořečnatý a dusičnan vápenatý)
- Aminokyseliny
- Vitaminy (i-inositol, cholinchlorid, kyselina para-aminobenzoová, kyselina listová, nikotinamid, pyridoxin hydrochlorid, thiamin hydrochlorid, pantothenát vápenatý, biotin a riboflavin, kyanokobalamin)
Speciální vlastností RPMI je zvýšená koncentrace fosfátů v médiu. RPMI se používá v atmosféře 5% oxidu uhličitého. To poskytne maximální a optimální podmínky pro růst buněk. pH média je udržováno na hodnotě 8,0 pomocí bikarbonátového pufrovacího systému.
Obrázek 01: Buněčná kultura na Petriho misce
Aplikace RPMI v buněčné kultuře
- Kultivace lidských T a B lymfocytů, buněk kostní dřeně a hybridomů.
- Používá se ke studiu lidských neoplastických buněk.
Co je DMEM?
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) je upravené médium, které je komerčně připraveno. Původní textura středního prášku je žlutá. V DMEM je koncentrace vitamínů zvýšena až čtyřnásobně, čímž se zvyšuje obsah živin v médiu.
DMEM je také upraven přidáním více solí, jako je dusičnan železitý, pyruvát sodný a některé neesenciální aminokyseliny, jako je serin a glycin. Složení glukózy v médiu je také změněno. Původní formulace se skládá z 1000 mg/l glukózy, zatímco v DMEM je koncentrace zvýšena až na 4500 mg/l. DMEM také vyžaduje doplnění sérového média, protože to není kompletní médium. Nejčastěji se DMEM doplňuje fetálním bovinním sérem (FBS). FBS poskytuje potřebné proteiny a růstové faktory pro proces kultivace.
Ph média se mění po přidání hydrogenuhličitanu sodného. pH média před přidáním hydrogenuhličitanu sodného je kolem 6,80 – 7,40, zatímco pH po přidání hydrogenuhličitanu sodného je v rozmezí 7,60 – 8,20. Skladovací teplota média je 2 – 8 0C.
Obrázek 02: DMEM
Aplikace DMEM
- Studovat schopnost polyomaviru tvořit plaky v myších embryonálních buňkách.
- Ve studiích kontaktní inhibice.
- Ve výzkumu a analýze kultur kuřecích buněk.
Jaké jsou podobnosti mezi RPMI a DMEM?
- Jak RPMI, tak DMEM se používají ve zvířecích buněčných kulturách.
- Média RPMI i DMEM jsou kapalné přípravky.
- Média RPMI i DMEM obsahují esenciální aminokyseliny, vitamíny a anorganické soli potřebné pro růst.
- Média RPMI i DMEM jsou neúplná. Proto by mělo být přidáno sérum.
- Média RPMI i DMEM používají jako zdroj uhlíku glukózu.
- Média RPMI i DMEM mají vyšší pH.
Jaký je rozdíl mezi RPMI a DMEM?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI je médium široce používané ke kultivaci savčích buněk v suspenzní kultuře. | DMEM je upravený typ bazálního média se zvýšenou koncentrací aminokyselin a vitamínů. |
| Přítomnost extra fosfátů | |
| Přítomno v RPMI. | Nepřítomný v DMEM. |
| Použití | |
|
Používá se ke kultivaci buněk v adherentních kulturách. Je zvyklý,
|
| Typy kultury | |
| RPMI se používá pro suspenzní kultury. | DMEM se používá pro kultury s přilnutými buňkami. |
Shrnutí – RPMI vs DMEM
Jak RPMI, tak DMEM se široce používají při kultivaci živočišných buněk, zejména ke kultivaci zvířecích buněčných linií včetně lymfocytů in vitro. DMEM je modifikované bazální médium, kde je zvýšená koncentrace živin. RPMI vyvinuté Roswell Park Memorial Institute a je to také médium používané při kultivaci živočišných buněk, zejména pro savčí lymfocyty. Obě média jsou komerčně dostupná. Toto je rozdíl mezi RPMI a DMEM.
