Klíčový rozdíl – HPLC vs HPTLC
Klíčový rozdíl mezi HPLC a HPTLC spočívá v tom, že HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku, zatímco HPTLC neumožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku.
Chromatografie je fyzikální separační metoda, která se používá k separaci a identifikaci složek ve směsi. HPLC i HPTLC jsou chromatografické techniky. HPLC je vysoce účinná kapalinová chromatografie. HPTLC je vysoce výkonná tenkovrstvá chromatografie.
Co je to HPLC?
HPLC je vysoce výkonná kapalinová chromatografie. Je to analytická technika používaná k separaci, identifikaci a kvantifikaci složek ve směsi. Při této technice se vzorek rozpustí ve vhodném rozpouštědle. Poté rozpouštědlo se vzorkem prochází čerpadlem o daném tlaku. Čerpadlo je naplněno pevným adsorpčním materiálem. Potom se některé složky pevně vážou k absorpčnímu materiálu, zatímco jiné složky se vážou volně. To způsobuje, že komponenty mají různé průtoky čerpadlem. Proto lze součásti snadno oddělit.
Obrázek 01: Systém HPLC
Adsorbční materiál, který plní čerpadlo, je známý jako stacionární fáze. Rozpouštědlo s rozpuštěným vzorkem je známé jako mobilní fáze. Čerpadlo použité v této technice se nazývá kolona. Kolona je naplněna adsorpčním materiálem, nejčastěji částicemi oxidu křemičitého. Velikost těchto částic se může pohybovat od 2 do 50 um. Proces separace je ovlivněn složením mobilní fáze a teplotou systému. Interakce mezi stacionární fází a složkou ve vzorku mohou být hydrofobní interakce, interakce dipól-dipól, iontová vazba atd.
Provozní tlak HPLC je podstatně vyšší než u tradiční kapalinové chromatografie. Pohybuje se kolem 50-350 barů. Rozdíl mezi kapalinovou chromatografií a HPLC je ten, že při kapalinové chromatografii vzorek propadá kolonou gravitací, zatímco při HPLC je vzorek natlakován přes kolonu. Velikost kolony a částic absorbentu jsou také velmi malé ve srovnání s tradiční kapalinovou chromatografií. Rozlišení dané technikou HPLC je však lepší.
Co je HPTLC?
HPTLC je vysoce výkonná tenkovrstvá chromatografie. Je to pokročilá a automatizovaná forma tradičního TLC. Tato technika poskytuje efektivní rozlišení v krátkém časovém období. Při této metodě analýzy mohou být vzorek a reference analyzovány současně, což umožňuje porovnání vzorku s referenčním. Poskytuje lepší analytickou přesnost než jiné chromatografické techniky. Doba potřebná pro analýzu je kratší. Tato technika je nízkonákladová.
Obrázek 02: Analýza potravinářských barviv pomocí HPTLC
Metoda HPTLC je jednoduchý proces a také odpadá krok přípravy vzorku (v tradiční TLC je krok přípravy vzorku zahrnut před separací. Tento krok zahrnuje čištění a obohacování). Rozpouštědlo lze použít přímo bez jakékoli předúpravy, i když jiné chromatografické techniky vyžadují předúpravu, jako je odplynění, filtrace atd.
Adsorbčním materiálem používaným při HPTLC je oxid křemičitý s velmi malými částicemi. V tradiční TLC je velikost částic oxidu křemičitého 5-20 μm, zatímco v HPTLC je to 4-8 μm. Vzorek se nanese na HPTLC desku pomocí aplikátoru. Poskytuje jednotné a bezpečné použití. Poté se desky umístí do komory s mobilní fází. Komora by měla být nasycena parami mobilní fáze. Po procesu HPTLC lze detekovat místa, která se posunula. Při detekci skvrn na destičce využívá technika HPTLC vhodnou UV oblast nebo jódovou komoru.
Jaký je rozdíl mezi HPLC a HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC je vysoce výkonná kapalinová chromatografie. | HPTLC je vysoce výkonná tenkovrstvá chromatografie. |
| Technika | |
| Při HPLC se mobilní fáze s rozpouštědlem vede přes kolonu naplněnou stacionární fází. | V HPTLC je vzorek nanesen na TLC destičku a umístěn do komory obsahující mobilní fázi; pak se vzorek nechá migrovat vzhůru destičkou spolu s mobilní fází. |
| Měření | |
| V HPLC se rozdíly mezi průtoky složek kolonou používají k oddělení složek ve vzorku. | V HPTLC se rozdíly mezi vzdálenostmi uraženými každou složkou ve vzorku používají k oddělení složek ve vzorku. |
| Kvantitativní separace | |
| HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku. | HPTLC neumožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku. |
Shrnutí – HPLC vs HPTLC
HPLC a HPTLC jsou dvě chromatografické techniky. Klíčový rozdíl mezi HPLC a HPTLC spočívá v tom, že HPLC umožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku, zatímco HPTLC neumožňuje kvantitativní separaci složek ve vzorku.
