Klíčový rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu spočívá v tom, že amplifikace genu je proces vytváření mnoha kopií požadovaného genu in vitro polymerázovou řetězovou reakcí. Ale klonování genů je proces vytváření mnoha kopií genu zájmu in vivo vytvořením rekombinantního plazmidu a jeho transformací na hostitelskou bakterii.
Gen je specifický fragment DNA, který kóduje protein. Organismus má tisíce genů. Navíc je možné množit sekvence DNA důležitých genů pomocí molekulárně biologických technik. Genová amplifikace a genové klonování jsou dva takové postupy. Oba postupy produkují mnoho kopií požadovaného genu. Existuje však rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu, pokud jde o jejich metodologii.
Co je to genová amplifikace?
Genová amplifikace je proces vytváření kopií konkrétního genu pomocí polymerázové řetězové reakce. Pro amplifikaci genu by měla být DNA tohoto konkrétního organismu extrahována pomocí správného protokolu pro extrakci DNA. Poté by měla být extrahovaná dvouřetězcová DNA denaturována, aby se získaly oddělené jednotlivé řetězce. Další krok zahrnuje použití PCR reakce k vytvoření kopií požadovaného genu. Dále PCR směs obsahuje požadované primery, nukleotidy, enzym DNA polymerázu, templátovou DNA a další složky. Na konci programu PRC probíhá amplifikace genu zájmu.
Obrázek 01: Amplifikace genu
Amplifikace genu je navíc prvním krokem při detekci specifické sekvence, identifikaci organismu, diagnostice nemocí a vytváření genových knihoven atd.
Co je klonování genů?
Klonování genů je metoda v genetickém inženýrství k vytvoření genových knihoven nebo vytvoření mnoha kopií genu zájmu. Tento proces zahrnuje vytvoření rekombinantního plazmidu a transformaci rekombinantního plazmidu do hostitelské buňky, zejména bakteriální buňky. Klon je identická kopie původního organismu nebo molekuly. Klonování genů může vytvořit tisíce genových klonů.
Obrázek 02: Klonování genů
Jakmile je gen zájmu identifikován, může být oddělen od genomu konkrétního organismu jeho restrikcí specifickými restrikčními enzymy. Potom pomocí stejného restrikčního enzymu by se měly otevřít plazmidy (vektory) pro vložení genového fragmentu. Potom je rekombinantní plazmid transformován do hostitelské bakterie za použití různých metod, jako je elektroporace. Některé z rekombinantních plazmidů vstupují do hostitelských bakteriálních buněk. Pomocí antibiotika mohou být transformované bakterie selektovány, izolovány a kultivovány v čerstvém médiu. Tato technika tedy pomáhá získat miliony genových klonů.
Jaké jsou podobnosti mezi amplifikací genů a klonováním genů?
- Genová amplifikace a genové klonování jsou dvě molekulárně biologické techniky.
- V obou těchto technikách se určitá sekvence DNA nebo gen množí milionkrát nebo tisíckrát.
- Obě techniky jsou navíc v mnoha vědeckých oblastech nanejvýš důležité.
Jaký je rozdíl mezi genovou amplifikací a klonováním genů?
Genová amplifikace je proces, který vytváří kopie konkrétního genu pomocí in vitro metody zvané PCR. Na druhé straně je genové klonování proces, který vytváří kopie konkrétního genu pomocí in vivo metody prostřednictvím konstrukce rekombinantních vektorů a jejich množení v živém organismu. Toto je klíčový rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu. Navíc amplifikace genu trvá jen několik hodin, zatímco klonování genu trvá několik dní. I to tedy můžeme považovat za rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu. Navíc proces amplifikace genu vykazuje méně chyb, zatímco proces klonování genu vykazuje více chyb.
Následující infografika shrnuje rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu.
Shrnutí – Amplifikace genu vs klonování genu
Genová amplifikace je proces vytváření kopií požadovaného genu pomocí polymerázové řetězové reakce za podmínek in vitro, zatímco klonování genu je proces vytváření kopií požadovaného genu pomocí rekombinantní molekuly DNA a živého organismu/hostitele bakterie. Toto je základní rozdíl mezi amplifikací genu a klonováním genu.
