Klíčový rozdíl – Gram Stain versus Culture
Gramovo barvení je technika barvení, která se provádí za účelem diferenciace bakterií do dvou skupin podle tloušťky peptidoglykanové vrstvy v jejich buněčné stěně. Kultivace je metoda pěstování a udržování mikroorganismů v laboratorních podmínkách pro různé analýzy. Klíčovým rozdílem mezi gramovým barvením a kulturou je jejich funkce; gram kmen je technika barvení bakterií, kde kultivace je způsob pěstování a udržování mikroorganismů.
Co je Gram Stain?
Gramovo barvení je důležitá technika diferenciálního barvení používaná k identifikaci bakterií v mikrobiologii. Tuto techniku zavedl dánský bakteriolog Hans Christian Gram v roce 1884. Gramovo barvení kategorizuje bakterie do dvou hlavních skupin: gram pozitivní a gram negativní; ty jsou velmi důležité při klasifikaci a identifikaci bakterií. Gramovo barvení se provádí jako počáteční krok pro charakterizaci bakterií.
Bakterie jsou seskupeny na základě rozdílů v jejich buněčné stěně. Gram pozitivní bakterie obsahují ve své buněčné stěně silnou peptidoglykanovou vrstvu, zatímco gramnegativní bakterie obsahují ve své buněčné stěně tenkou peptidoglykanovou vrstvu, jak je znázorněno na obrázku 01. Výsledek gramového barvení bude založen na rozdílu tloušťky v peptidoglykanové vrstvě buněčná stěna.
Obrázek 1: Grampozitivní bakterie a gramnegativní bakterie
Gramsovo barvení se provádí pomocí čtyř různých činidel, jmenovitě; primární mořidlo, mořidlo, odbarvovací činidlo a protimoře. Krystalová violeť a safranin slouží jako primární a protibarva, zatímco gramy jódu a 95% alkoholu slouží jako mořidlo a odbarvovač.
Basic Steps of Grams Stain
- Na čistém podložním sklíčku se připraví bakteriální nátěr, zafixuje se teplem a ochladí.
- Stěr je zaplaven krystalovou violetí po dobu 1–2 minut.
- Stěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z kohoutku, aby se odstranily přebytečné skvrny.
- Gramy jódu se nanesou na nátěr po dobu 1 minuty.
- Stěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z kohoutku
- Stěr se omyje 95% alkoholem po dobu 2–5 sekund a opláchne pomalu tekoucí vodou z kohoutku.
- Stěr je obarven safraninem po dobu 1 minuty
- Stěr se opláchne pomalu tekoucí vodou z vodovodu, vysuší a pozoruje pod mikroskopem.
Na konci gramového barvení budou gramnegativní bakterie pozorovány růžově, zatímco grampozitivní bakterie budou pozorovány fialově, jak je znázorněno na obrázku 02. O výsledku gramového barvení rozhoduje tloušťka peptidoglykanové vrstvy v jejich buněčné stěně. Během odbarvovacího kroku se primární skvrna a mořidlo snadno odstraní z gramnegativních bakterií a stanou se bezbarvé, protože mají tenkou peptidoglykanovou vrstvu. Primární barvivo je zadrženo v grampozitivních bakteriích, protože mají silnou peptidoglykanovou vrstvu. Protibarva nebude účinná u grampozitivních bakterií kvůli zadržení primární skvrny. Takže grampozitivní bakterie budou viditelné v primární barvě skvrn, tj. fialové barvě. Protibarva obarví gramnegativní bakterie a bude viditelná v barvě sběru, což je barva safraninu. Proto je snadné kategorizovat bakterie do dvou skupin podle gramového barvení a je cenné při bakteriální diferenciaci a identifikaci.
Obrázek 2: Gramův kmen
Co je kultura?
Mikrobiální kultivace je metoda kultivace a udržování mikroorganismů v laboratorních podmínkách pro různé účely. Kultury se pěstují v pevných, polotuhých a kapalných médiích v závislosti na typu a účelu kultivace mikroorganismu. Kultury jsou opatřeny nezbytnými živinami a růstovými podmínkami, které mikroorganismy vyžadují. Kultivační médium obsahuje různé složky, jako je zdroj energie, zdroj uhlíku, zdroj dusíku, minerály, mikroživiny, voda, tužidlo atd. Optimální teplota, kyslík a pH by měly být upraveny podle typu pěstovaného mikroorganismu.
Existují různé typy mikrobiálních kultur; například vsádková kultura, kontinuální kultura, bodnutí, kultivace na agarové plotně, kultivace v bujónu atd. Podle složení pěstebního média existují různé typy kultivačních médií známých jako syntetická média, polosyntetická média a přírodní média. Mikrobiální kultury se připravují za sterilních podmínek ve speciální komoře zvané laminární proudění vzduchu. Pěstovací médium a skleněné nádobí se před inokulací požadovaného mikroorganismu sterilizují. Za vhodných sterilních podmínek je cílový mikroorganismus přenesen do sterilizovaného živného média a inkubován při optimální teplotě. Uvnitř média bude mikroorganismus růst a množit se pomocí poskytnutých živin.
Obrázek 3: Bakteriální kultura na misce
Jaký je rozdíl mezi Gram Stain a Culture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Gramsův kmen je technika diferenciálního barvení používaná pro bakteriální diferenciaci a identifikaci. | Mikrobiální kultivace je metoda pěstování mikroorganismů v laboratoři. |
| Components | |
| Toto používá různá činidla včetně dvou skvrn. | Toto používá různá kultivační média, jako jsou pevná, polotuhá a tekutá média složená z živin a dalších nezbytných podmínek. |
| Základní funkce | |
| To umožňuje seskupení bakterií do dvou skupin: gramnegativní a grampozitivní. | To umožňuje množení mikroorganismů pro různé účely. |
| Základ | |
| Výsledek Gramova barvení je založen na rozdílech v peptidoglykanové vrstvě buněčné stěny. | Mikroorganismy budou růst a množit se uvnitř kultivačního média. |
| Výsledek | |
| Gramnegativní bakterie jsou viditelné růžovou barvou a grampozitivní bakterie jsou viditelné fialovou barvou. | Na miskách jsou vidět kolonie mikroorganismů. Na kapalných médiích jsou mikroorganismy v suspendované formě. |
Shrnutí – Gram Stain vs Culture
Mikrobiální kultury se připravují a udržují v laboratorních podmínkách pro různé účely, jako je skladování, testování, chemické čištění atd. Gramsovo barvení je postup barvení, který rozlišuje bakterie do dvou hlavních skupin nazývaných gramnegativní bakterie a grampozitivní bakterie. Rozdíl mezi gramovým barvením a kulturou je tedy ten, že gramové barvení je technika barvení bakterií, zatímco kultivace je metoda pěstování a udržování mikroorganismů v laboratořích.
