Klíčový rozdíl – stránka SDS vs. Western Blot
Western blotting je technika, která detekuje specifický protein ze vzorku proteinu. Tato technika se provádí prostřednictvím několika klíčových kroků: gelová elektroforéza, blotování a hybridizace. Polyakrylamidová gelová elektroforéza s dodecylsulfátem sodným (SDS Page) je druh techniky gelové elektroforézy, která se používá k separaci proteinů podle jejich velikosti (molekulární hmotnosti). Western blot je speciální vrstva blotovací membrány, která se používá k přenosu stejného vzoru proteinů na stránce SDS. Klíčový rozdíl mezi SDS Page a western blotem je ten, že SDS Page umožňuje separaci proteinů ve směsi, zatímco western blot umožňuje detekci a kvantifikaci specifického proteinu ze směsi. Oba jsou užitečné při studiích analýzy proteinů.
Co je stránka SDS?
SDS Page je technika gelové elektroforézy používaná pro separaci proteinů. Běžně se používá v biochemii, genetice, forenzní a molekulární biologii. Jakmile jsou proteiny extrahovány ze vzorku, běží na gelu složeném z SDS a polyakrylamidu. SDS je aniontový detergent, který se používá k linearizaci proteinů (denaturační proteiny) ak předání negativního náboje linearizovaným proteinům úměrným jejich molekulové hmotnosti. Polyakrylamid se stává pevným nosičem gelu. Denaturované proteiny, které jsou záporně nabité, migrují gelem ke kladnému konci aparátu. Podle velikosti proteinů se rychlost migrace mezi proteiny liší a dochází k separaci. Proto je stránka SDS užitečná pro separaci jednotlivých proteinů na základě jejich velikosti.
Příprava polyakrylamidového gelu pro frakcionaci proteinů je zásadním krokem v SDS Page. Správná koncentrace polyakrylamidu a typ použitého síťovacího činidla silně ovlivňují fyzikální vlastnosti gelu, což umožňuje skutečnou separaci různých proteinů. Velikost pórů gelu by měla být správně upravena pro účinnou separaci. SDS Page je však považována za techniku separace proteinů s vysokým rozlišením.
Technika SDS Page má velké omezení v analýze proteinů. Protože SDS před separací denaturuje proteiny, neumožňuje detekci enzymatické aktivity, vazebných interakcí proteinů, proteinových kofaktorů atd.
Obrázek 01: Strana SDS
Co je Western Blot?
Technika Western blotting umožňuje detekci specifického proteinu z proteinové směsi a měření množství a molekulové hmotnosti proteinu. Western blot je membrána používaná během blotovacího postupu k získání zrcadlového obrazu proteinových vzorů v SDS-polyakrylamidovém gelu. Membrána, která se používá pro western blot, je většinou tvořena nitrocelulózou nebo polyvinylidendifluoridem (PVDF). Membrána s přeneseným proteinem může být použita k identifikaci požadovaného proteinu. Vyžaduje vysoce kvalitní protilátku pro detekci požadovaného proteinu hybridizací. Protilátka se naváže na svůj specifický antigen a odhalí přítomnost požadovaného antigenu, kterým je protein.
Přenos proteinů z SDS polyakrylamidového gelu na western blot se provádí elektroblotováním. Je to efektivní a rychlá metoda, která způsobí, že proteiny elektroforézou z gelu přejdou na nitrocelulózovou membránu (western blot).
Obrázek 02: Western Blot
Jaký je rozdíl mezi SDS Page a Western Blot?
Stránka SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page je technika gelové elektroforézy. | Western blot je technika, která se provádí na membráně k detekci specifického proteinu ze směsi. |
| Použít | |
| Stránka SDS umožňuje separaci proteinů podle jejich velikosti. | Western blot umožňuje přenos proteinů na gel stránky SDS bez změny jeho vzoru a umožňuje hybridizaci se specifickými protilátkami. |
| Nevýhody | |
| Nevýhodami této techniky jsou denaturace bílkovin, vysoká cena a přítomnost neurotoxinových chemikálií. | Tato technika je časově náročná a vyžaduje dobré zkušené osobní a specifické kontrolované podmínky. |
Shrnutí – Stránka SDS vs Western Blot
Stránka SDS a western blot jsou dvě metody zapojené do analýzy proteinů. SDS Page umožňuje snadnou separaci proteinů na gelu podle jejich molekulové hmotnosti. Western blot pomáhá potvrdit přítomnost a množství specifického proteinu prostřednictvím hybridizace se specifickými protilátkami. Toto je rozdíl mezi SDS Page a western blotem.
