Klíčový rozdíl – Transformanty vs Rekombinanty
Rekombinace a transformace jsou dva zásadní kroky v genetickém inženýrství, kde jsou vlastnosti organismu záměrně modifikovány manipulací s jeho genetickým materiálem. Rekombinace je proces, při kterém je cizí DNA inkorporována do vektorového genomu a vzniká rekombinantní molekula DNA. Transformace je dalším krokem, ve kterém je rekombinantní molekula vložena do hostitelského organismu. Hostitelská buňka nebo organismus usnadňuje expresi rekombinantní molekuly. Klíčový rozdíl mezi transformanty a rekombinanty je v tom, že transformanty jsou buňky nebo organismy, které přijímají rekombinantní molekulu dovnitř a usnadňují expresi, zatímco rekombinanty jsou vektory, které umožňují inzerci cizí DNA do jejího genomu a transport do hostitelských transformantů pro expresi.
Co jsou transformanty?
Transformanty jsou buňky nebo organismy, ve kterých je přijímána rekombinantní DNA pro expresi. Bakterie se běžně používají jako hostitelské organismy v genetickém inženýrství, protože se snadno pěstují, množí a manipuluje s nimi v laboratorních podmínkách a proces transformace je ve srovnání s jinými organismy snadný. Nejoblíbenější hostitelskou bakterií používanou v genetickém inženýrství je bakterie E coli.
Během transformačního procesu jsou hostitelské buňky indukovány, aby přijaly rekombinanty. Některé hostitelské buňky však rekombinantní molekuly nepřijímají. Jsou známé jako netransformanty a buňky, které uvnitř obsahují molekuly rekombinantní DNA, jsou známé jako transformanty. Selekce transformantů z netransformantů se provádí pomocí selektovatelných markerů v molekulární biologii. Selektovatelné markery jsou vloženy do vektorového genomu společně s DNA insertem. Běžně používané selektovatelné markery jsou geny rezistentní na antibiotika. Markerové geny usnadňují diferenciaci transformantů a pokračují v procesu. Po transformačním procesu se bakterie pěstuje v médiu obsahujícím antibiotikum. Pouze transformanty jsou schopny růstu na tomto médiu, protože mají uvnitř rekombinanty.
Jakmile je molekula rekombinantní DNA transformována uvnitř hostitelského organismu, může být cizí DNA integrována do genomu hostitelské buňky nebo zůstat neintegrovaná v cytoplazmě. K expresi a replikaci cizí DNA však dochází v hostitelském organismu a výsledkem procesu je požadovaný výsledek.
Co jsou rekombinanty?
Rekombinant je organismus nebo buňka, která má rekombinovaný genom obsahující cizí DNA. Rekombinanty jsou výsledkem procesu genetického inženýrství. Jsou uměle konstruovány in vitro vložením požadovaných genů a modifikací genomu. Bakteriální plazmidy a bakteriofágy často působí jako rekombinanty v genetickém inženýrství. Má chiméru různých DNA. Rekombinantní molekula DNA přenáší cizí DNA do hostitelského organismu a umožňuje ji exprimovat a vytvářet požadovaný produkt.
Rekombinantní molekuly jsou konstruovány pomocí restrikčních endonukleáz a DNA ligáz. Požadovaný fragment DNA se oddělí od původního organismu a vloží se do vektoru, aby se vytvořil rekombinant pro transformaci. Řezání požadovaného genu a otevření vektorového organismu by mělo být provedeno pomocí stejného restrikčního enzymu, aby se vytvořily kompatibilní lepivé konce, které je spojí dohromady. Jakmile je cizí DNA začleněna do vektorového genomu, je známá jako rekombinantní nebo rekombinantní molekula DNA.
Obrázek 02: Rekombinantní DNA
Jaký je rozdíl mezi transformanty a rekombinanty?
Transformanty vs Rekombinanty |
|
| Transformanty jsou buňky, které mají uvnitř molekulu rekombinantní DNA. | Rekombinanty jsou nosné molekuly, které mají cizí DNA vloženou do vlastního genomu. |
| Exprese cizí DNA | |
| Jsou to hostitelské buňky, které jsou schopny exprimovat rekombinantní DNA. | Měly by být schopny se samy replikovat v hostitelském organismu. |
| Selection | |
| Jako hostitelské buňky jsou vybrány buňky, které lze snadno pěstovat a množit. | Musí být snadno extrahovatelné a měly by obsahovat volitelné značky. |
Shrnutí – Transformanty vs Rekombinanty
Transformanty jsou buňky nebo organismy s rekombinantními molekulami DNA uvnitř. Rekombinanty jsou organismy nebo buňky, které prošly genetickou rekombinací a mají ve svých genomech cizí DNA. Bakteriální buňky se často používají jako hostitelské buňky pro transformaci a plazmidy a bakteriofágy se často používají jako vektory v technologii rekombinantní DNA. Toto je rozdíl mezi transformanty a rekombinanty.
