Klíčový rozdíl mezi nanášecí destičkou a nanášenou destičkou je v tom, že známý objem vzorku je nanesen na povrch agarového média v nanášené destičce, zatímco při přelévací destičce je známý objem vzorku smíchán s agar a poté nalijte na talíř. Při porovnávání přesnosti těchto dvou technik má litá deska vyšší přesnost než nanášecí deska.
Standardní metoda počítání na plotnách je přístup založený na růstu, který počítá počet živých (rostoucích/kultivovatelných/životaschopných) mikroorganismů ve vzorku. Je to výkonná metoda používaná v mnoha mikrobiologických oblastech k analýze počtu živých mikroorganismů. Oblasti jako potravinářství a mlékárenství, lékařství, životní prostředí, vodní hospodářství a zemědělství, mikrobiální genetika, molekulární mikrobiologie, vývoj růstových médií a biotechnologie (technologie bioreaktorů, fermentace, čištění odpadních/odpadních vod atd.) využívají tuto techniku. Kromě toho existují dva hlavní způsoby, jak provést standardní počítání destiček: jsou to technika rozprostřeného talíře a technika nalití talíře.
Co je nalévací talíř?
Technika nalévací destičky je mikrobiální metoda pro stanovení některých životaschopných buněk přítomných ve vzorku. Specialitou metody nalévací destičky je to, že známý objem vzorku je nejprve smíchán s agarem a poté nalit na destičku.
Obrázek 01: Pour talíř
Další kroky jsou podobné technice rozprostřeného talíře, o které se pojednává v další části. Dalším krokem po nalití agaru smíchaného se vzorkem je nechat jej ztuhnout a inkubovat. Po inkubaci je nezbytné spočítat počet životaschopných kolonií pro výpočet konečné CFU pro 1 g nebo 1 ml.
Co je rozprostřený talíř?
Spread plate je technika pro stanovení počtu životaschopných buněk ve vzorku. U této techniky je nutné sériové ředění vzorku, aby se zajistilo, že alespoň jedna dá vzniknout počitatelnému počtu kolonií. Zde se postupuje tak, že se na povrch agarové plotny napipetuje stanovený objem ředění a rychle a rovnoměrně se rozetře po povrchu agaru skleněným nástřikem, který byl zapálen alkoholem a ochlazen. Provedení opakování je nezbytné pro získání spolehlivé střední hodnoty. Dalším krokem je sušení těchto destiček na krátkou dobu a poté převrácením a umístěním do inkubátoru při teplotě vhodné pro růst a po nastavenou inkubační dobu.
Obrázek 02: Rozprostřený talíř
Po inkubaci ukáže zkoumání misek růst. Při jednom nebo více ředěních počet buněk přítomných v inokulantech (např. 100 nebo 200 μl) způsobí vznik 30 až 300 samostatných kolonií na povrchu agaru. Počty méně než 30 kolonií jsou statisticky nespolehlivé. Počty nad 300 je obtížné vyčíslit a jsou náchylné k chybám.
Jaké jsou podobnosti mezi nalévacím a rozprostřeným talířem?
- Spread plate a pour plate jsou dvě techniky k získání počtu životaschopných buněk přítomných ve vzorku.
- Oba jsou přímé metody.
- Vzorkové chyby se mohou vyskytnout v obou metodách.
- Omezení podmínek růstu ovlivňují výsledek obou metod.
- Konečný výsledek obou metod mohou ovlivnit také technické chyby.
- Přestože jsou tyto dvě metody životaschopné, nepoužívají se k pěstování nekultivovatelných bakterií.
Jaký je rozdíl mezi nalévacím a rozprostřeným talířem?
Pour plate je mikrobiální technika pro stanovení počtu životaschopných buněk ve vzorku. Technika rozprostřených ploten je další technikou pro stanovení počtu bakterií rostoucích na povrchu média. V technice nalévací desky je proces přidání vzorku na ztuhlý povrch média na nalévací desce. Ale v technice spred plotny je proces smíchat vzorek s roztaveným agarem a poté jej nalít na plotnu.
S ohledem na přesnost těchto dvou technik má litá deska vyšší přesnost než nanášecí deska. Navíc, na rozdíl od nalévací desky, se k rovnoměrnému rozprostření vzorku na povrchu na nanášecí desce používá skleněná stěrka. Dále pomocí nalévací desky je možné vyčíslit aeroby, anaeroby a fakultativní anaeroby. S použitím rozkládací desky je však možné pouze vyčíslit aeroby. Kromě toho jsou ztuhlé agarové plotny nezbytné k provedení nanášecí plotny, zatímco tekuté roztavené agarové médium je nezbytné pro metodu lití.
Shrnutí – nalít talíř vs rozprostřený talíř
Pour plate a Spread plate jsou dvě techniky v mikrobiologii, které usnadňují stanovení počtu mikrobiálních buněk ve vzorku. Obě metody jsou založeny na růstu, proto měřte životaschopné buňky. Během nalévací desky se známý objem vzorku smíchá s roztaveným agarem a nalije se na desku. Během nanášecí desky se známý objem nanese na povrch ztuhlého agarového média. To je rozdíl mezi nalévacím a nanášecím talířem.
