Klíčový rozdíl – průtoková cytometrie vs FACS
V kontextu buněčné teorie jsou buňky základní strukturní a funkční jednotkou všech živých organismů. Třídění buněk je metodologie, která se používá k oddělení různých buněk podle fyziologických a morfologických vlastností. Mohou mít intracelulární nebo extracelulární vlastnosti. Interakce DNA, RNA a proteinů jsou považovány za intracelulární interaktivní vlastnosti, zatímco tvar, velikost a různé povrchové proteiny jsou považovány za extracelulární vlastnosti. V moderní vědě vedly metodologie buněčného třídění k podpoře různých výzkumů v biologických studiích a také při zavádění nových principů prostřednictvím výzkumu v medicíně. Třídění buněk se provádí na různých metodologiích, které zahrnují jak primitivní s menším vybavením, tak pokročilé technologické metodiky s využitím sofistikovaných strojů. Průtoková cytometrie, fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS), magnetická selekce buněk a třídění jednotlivých buněk jsou hlavními používanými metodikami. Průtoková cytometrie a FACS jsou vyvinuty k diferenciaci buněk podle jejich optických vlastností. FACS je specializovaný typ průtokové cytometrie. Průtoková cytometrie je metodologie, která se používá při analýze heterogenní populace buněk podle různých molekul buněčného povrchu, velikosti a objemu, která umožňuje zkoumání jednotlivých buněk. FACS je proces, při kterém se směs vzorků buněk třídí podle jejich rozptylu světla a fluorescenčních charakteristik do dvou nebo více nádob. Toto je klíčový rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS.
Co je průtoková cytometrie?
Průtoková cytometrie je metoda, která se používá ke zkoumání a stanovení exprese intracelulárních molekul a buněčného povrchu ak definování a charakterizaci různých typů buněk. Používá se také při určování objemu buněk a velikosti buněk a pro hodnocení čistoty subpopulací, které jsou izolovány. To umožňuje víceparametrové vyhodnocení jednotlivých buněk přibližně ve stejnou dobu. Průtoková cytometrie se používá k měření intenzity fluorescence, která vzniká díky fluorescenčně značeným protilátkám, které pomáhají identifikovat proteiny nebo ligandy, které se vážou na asociované buňky.
Obrázek 01: Průtoková cytometrie
Obecně průtoková cytometrie zahrnuje především tři podsystémy. Jsou to fluidika, elektronika a optika. V průtokové cytometrii je k dispozici pět hlavních složek, které se používají při třídění buněk. Jsou to průtoková kyveta (proud kapaliny, která se používá k jejich přepravě a vyrovnání kyvet pro proces optického snímání), systém měření (může mít různé systémy včetně rtuťových a xenonových výbojek, vysoce výkonné vodou chlazené nebo vzduchem chlazené lasery nebo diodové lasery s nízkým výkonem), ADC; Analogově digitální převodník, zesilovací systém a počítač pro analýzu. Akvizice je proces, při kterém se data sbírají ze vzorků pomocí průtokového cytometru. Tento proces zprostředkovává počítač, který je propojen s průtokovým cytometrem. Software přítomný v počítači analyzuje informace přiváděné do počítače z průtokového cytometru. Software má také schopnost upravovat parametry experimentu ovládání průtokového cytometru.
Co je FACS?
V kontextu průtokové cytometrie je fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS) metoda, která se používá při diferenciaci a třídění vzorku směsi biologických buněk. Buňky jsou odděleny ze dvou nebo více nádob. Metoda třídění je založena na fyzikálních vlastnostech buňky, která zahrnuje rozptyl světla a fluorescenční charakteristiky buňky. Jedná se o důležitou vědeckou techniku, kterou lze využít k získání spolehlivých kvantitativních a kvalitativních výsledků fluorescenčních signálů, které jsou emitovány z každé buňky. Během FACS zpočátku předem získaná směs buněk; suspenze je směrována do středu úzkého proudu kapaliny, který rychle proudí. Proud kapaliny je navržen tak, aby oddělil buňky v suspenzi na základě průměru každé buňky. Na proud suspenze je aplikován mechanismus vibrací, který má za následek tvorbu jednotlivých kapiček.
Obrázek 02: FACS
Systém je kalibrován tak, aby vytvořil jedinou kapku s jednou buňkou. Těsně před tvorbou kapiček se proudící suspenze pohybuje podél přístroje pro měření fluorescence, který detekuje fluorescenční charakteristiky každé buňky. V místě tvorby kapiček je umístěn elektrický nabíjecí prstenec, který je do prstence indukován před měřením intenzity fluorescence. Jakmile jsou kapičky vytvořeny z proudu suspenze, je v kapičkách zachycen náboj, který pak vstupuje do elektrostatického vychylovacího systému. Podle náboje systém odvádí kapky do různých nádob. Způsob aplikace náboje se liší podle různých systémů používaných ve FACS. Zařízení používané ve FACS je známé jako fluorescenčně aktivovaný třídič buněk.
Jaká je podobnost mezi průtokovou cytometrií a FACS?
Průtoková cytometrie a FACS jsou vyvinuty k diferenciaci buněk podle jejich optických vlastností
Jaký je rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS?
Průtoková cytometrie vs FACS |
|
| Průtoková cytometrie je metodologie, která se používá při analýze heterogenní populace buněk podle různých molekul buněčného povrchu, velikosti a objemu, což umožňuje zkoumání jednotlivých buněk. | FACS je proces, při kterém se směs vzorků buněk třídí podle jejich rozptylu světla a fluorescenčních charakteristik do dvou nebo více nádob. |
Shrnutí – průtoková cytometrie vs FACS
Buňka je základní stavební a funkční jednotkou všech živých organismů. Třídění buněk je proces, kterým jsou buňky izolovány a diferencovány do různých kategorií na základě jejich intracelulárních a extracelulárních vlastností. Průtoková cytometrie a FACS jsou dvě důležité metodiky při třídění buněk. Oba procesy jsou vyvinuty k diferenciaci buněk podle jejich optických vlastností. Průtoková cytometrie je metodologie, která se používá při analýze heterogenní populace buněk podle různých molekul buněčného povrchu, velikosti a objemu, která umožňuje zkoumání jednotlivých buněk. FACS je proces, při kterém se směs vzorků buněk třídí podle jejich rozptylu světla a fluorescenčních charakteristik do dvou nebo více nádob. Toto je rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS.
Stáhněte si PDF verzi průtokové cytometrie vs FACS
Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro offline účely podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS
