Klíčový rozdíl mezi Elisou a Elispot je v tom, že Elisa je enzymatický imunosorbentní test, který určuje celkovou koncentraci secernovaných signálních proteinů, zatímco Elispot je enzymatický imunosorbentní test, který detekuje jednotlivé buňky vylučující cytokiny.
Elisa a Elispot jsou dva enzymatické imunosorbentní testy široce používané v lékařství, patologii rostlin, biotechnologiích a různých farmaceutických odvětvích. V těchto technikách je proteinový analyt detekován protilátkou namířenou proti němu. Elisa je nejpopulárnější enzymatický imunosorbentní test používaný v laboratořích. Na druhou stranu Elispot je enzymatická imunoanalýza, která se nepoužívá místo Elisy, ale používá se v laboratořích vedle Elisy.
Co je Elisa Assay?
Elisa je enzymatický imunosorbentní test, který určuje celkovou koncentraci secernovaných signálních proteinů. Jde o široce používaný analytický biochemický test, který poprvé popsali Engvall a Perlmann v roce 1971. Tato technika využívá typ enzymového imunotestu na pevné fázi k detekci přítomnosti specifického proteinu v kapalném vzorku pomocí protilátek namířených proti tomuto specifickému proteinu. Tento test je běžně používaným diagnostickým nástrojem v medicíně, patologii rostlin a biotechnologii.
Mechanismus testu ELISA
Ve většině testů ELISA je na začátku neznámé množství antigenu imobilizováno na pevném nosiči (mikrolitrové destičce). Poté se na pevný povrch nosiče aplikuje odpovídající primární protilátka. Tato protilátka tvoří s antigenem komplex (komplex antigen-protilátka). Primární protilátka navázaná na antigen může být detekována sekundární protilátkou, která je spojena s enzymem prostřednictvím biokonjugace. V posledním kroku testu Elisa se přidá látka obsahující substrát enzymu. Pokud dojde ke správné vazbě primární protilátky na antigen, substrát vytvoří detekovatelnou změnu barvy. Nakonec to kvantifikuje antigen ve vzorku.
Obrázek 01: Různé typy Elisy
Kromě toho existují různé přístupy k Elise, jako je přímá Elisa a nepřímá Elisa. V současné době se k detekci lidských patogenů, jako je Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virus hepatitidy B, virus hepatitidy C, enterotoxin produkující E.coli, HIV a SARS-CoV-2, používají různé testy Elisa.
Co je Elispot Assay?
Elispot je enzymatický imunosorbentní test, který detekuje jednotlivé buňky vylučující cytokiny. Cecil Czerkinsky poprvé popsal ELISpot v roce 1983. Je to typ testu, který se zaměřuje na kvantitativní měření frekvence sekrece cytokinů pro jednu buňku. Je také klasifikována jako technika, která používá protilátky k detekci biologického nebo chemického proteinového analytu. Fluorospot test je variací testu Elispot, který využívá fluorescenci k analýze více analytů (sekretnějších proteinů).
Mechanismus testu Elispot
V tomto mechanismu se zpočátku do jamek mikrolitrových destiček přidávají monoklonální protilátky specifické pro cytokiny. Poté se do jamek přidají požadované pozorované buňky. Později jsou buňky inkubovány. Během buněčné inkubace je buňkám umožněno reagovat na jakékoli podněty a vylučovat cytokin. Cytokiny, které byly vylučovány inkubovanými buňkami, se navážou na protilátky, protože buňky jsou obklopeny monoklonálními protilátkami specifickými pro cytokiny.
Obrázek 02: Elispot Assay
K detekci těchto cytokinově specifických monoklonálních protilátek se do jamky přidají biotinylované specifické detekční protilátky. Biotinylované specifické detekční protilátky zachycují cytokinově specifické monoklonální protilátky v jamkách. Navíc se do jamek přidávají konjugáty streptavidin-enzym, aby se navázaly na detekční protilátky. V posledním kroku se do jamek přidají specifické substráty. Reakce enzymových konjugátů a substrátů vytvářejí v jamkách zřetelné skvrny. Tyto odlišné body jsou čteny na automatické čtečce ELISpot. Nakonec to dále vypočítá frekvenci sekrece cytokinů.
Jaké jsou podobnosti mezi Elisou a Elispotem?
- Oba jsou to enzymatické imunosorbentní testy.
- Oba testy detekují specifické proteinové analyty.
- Tyto testy používají specifické protilátky k identifikaci proteinových analytů.
- Oba testy využívají enzymy a substráty.
- Používají se jako diagnostický nástroj v lékařských laboratořích.
Jaký je rozdíl mezi Elisou a Elispot?
Elisa je enzymatický imunosorbentní test, který určuje celkovou koncentraci secernovaných signálních proteinů. Na druhé straně je Elispot enzymatický imunosorbentní test, který měří jednotlivé buňky vylučující cytokiny. Toto je klíčový rozdíl mezi Elisou a Elispotem. Navíc v testu Elisa je antigen nejprve imobilizován na mikrolitrových jamkách. Naproti tomu v testu Elispot je protilátka nejprve imobilizována na mikrolitrových jamkách. To je tedy další rozdíl mezi Elisou a Elispot.
Níže uvedená infografika představuje podrobnou analýzu rozdílu mezi Elisou a Elispot v tabulkové formě.
Shrnutí – Elisa vs Elispot
Elisa a Elispot jsou dva enzymatické imunosorbentní testy široce používané v lékařství, patologii rostlin, biotechnologiích a různých farmaceutických odvětvích. Elisa detekuje přítomnost ligandu (proteinu) v kapalném vzorku pomocí protilátek namířených proti ligandu, který má být měřen. Elispot test je široce používaná metoda pro monitorování imunitních reakcí. Pomocí protilátek detekuje jednotlivé buňky vylučující cytokiny. Je to jak imunoanalýza, tak bioanalýza. Toto je shrnutí rozdílu mezi Elisou a Elispot.
