Klíčový rozdíl – Nitrocelulóza vs. Nylonová membrána
Blotting je důležitou technikou pro detekci specifických sekvencí DNA, RNA a proteinů z jejich směsí v molekulární biologii. Provádí se pomocí membrány zvané blot. Existují různé techniky blotování, jako je severní, jižní a západní blotování. Výběr správné membrány pro proces blotování by měl být proveden pečlivě, aby se zabránilo nespecifické vazbě a nesprávné detekci. Nitrocelulóza, nylon a PVDF jsou běžně používané membrány v blotovacích technikách. Mají různé vlastnosti. Klíčový rozdíl mezi nitrocelulózovou a nylonovou membránou je v tom, že nitrocelulózové membrány mají vysoký potenciál imobilizace proteinů, zatímco nylonové membrány mají vysoký potenciál imobilizace nukleových kyselin. Oba typy membrán se však často používají v blotovacích technikách.
Co je nitrocelulózová membrána?
Nitrocelulózová membrána je běžně používaný membránový filtr v technikách přenosu nukleových kyselin a proteinů. Má vysoký potenciál vázat bílkoviny. Proto jsou nitrocelulózové membrány široce používány v technice western blotting. Nitrocelulózové membrány jsou kompatibilní se všemi hybridizačními technikami a vykazují vynikající vazebné kapacity bez interferencí. Nitrocelulózové membrány jsou přirozeně hydrofilní povahy. Vytvářejí hydrofilní interakci s molekulami a účinně je imobilizují na membráně. Komerční nitrocelulózové membrány jsou dostupné ve dvou velikostech pórů: 0,45 a 0,2 µm.
Obrázek 01: Nitrocelulózová membrána používaná při westernovém přenosu
Co je to nylonová membrána?
Nylonová membrána je dalším typem komerční membrány používané v blotovacích technikách. Alternativně se používá s nitrocelulózovými membránami pro Southern a Northern blotting. Nylonové membrány jsou ideální pro Southern blotting než nitrocelulóza kvůli jejich vysoké afinitě k vazbě s DNA. Vzhledem k několika jedinečným vlastnostem nylonových membrán vědci běžně používají nylonové membrány pro Southern a Northern blotting místo přes nitrocelulózovou membránu. Nylonové membrány se na rozdíl od nitrocelulózy také doporučují pro stripování a resonding.
Obrázek 02: Nylonová membrána použitá pro Southern blotting
Jaký je rozdíl mezi nitrocelulózou a nylonovou membránou?
Nitrocelulóza vs Nylonová membrána |
|
| Nitrocelulózové membrány jsou křehké. | Nylonové membrány jsou méně křehké. |
| Handling | |
| Těžko se s nimi manipuluje. | Snadno se s nimi manipuluje. |
| Reprobing | |
| Nepodporované nitrocelulózové membrány je těžké znovu prozkoumat. | Odstranění je snadné s nylonovými membránami. |
| Kompatibilita s různými podmínkami skladování | |
| Nitrocelulózové membrány mají menší pevnost, aby vydržely různé podmínky skladování. | Nylonové membrány odolněji reagují na různé podmínky skladování. |
| Použít | |
| Je vyžadováno předvlhčení. | Předmáčení není vyžadováno pro nylonové membrány. |
| Hydrofilní příroda | |
| Nitrocelulózové membrány jsou hydrofilní povahy, ale jsou méně hydrofilní než nylonové membrány. | Jsou vysoce hydrofilní povahy. |
| Potenciál imobilizace | |
| Nitrocelulózové membrány mají menší afinitu k nukleovým kyselinám. Ale má vysokou afinitu k proteinům. | Nylonové membrány mají vyšší vazebný potenciál s nukleovými kyselinami než nitrocelulózové membrány. |
Shrnutí – Nitrocelulóza vs Nylonová membrána
Nitrocelulózové a nylonové membrány jsou speciální fólie používané v technice blotování k reprodukci pruhovaného vzoru na gelu. Umožňují možnost detekce specifické sekvence nebo proteinu ze směsí jejich imobilizací na membráně. Jakmile jsou molekuly imobilizovány na membráně, může být použita jako substrát pro hybridizační analýzu se značenými sondami. Nitrocelulózová membrána se běžně používá pro detekci proteinů v technice western blotting kvůli její vysoké vazebné afinitě k proteinům. Nylonové membrány se často používají pro Southern a Northern blotting. To je rozdíl mezi nitrocelulózovou a nylonovou membránou.
