Klíčový rozdíl mezi bradfordovým a Lowryho proteinovým testem je ten, že Bradfordův proteinový test je založen na posunu absorbance barviva Coomassie brilantní modř G-250, zatímco Lowryho proteinový test je založen na reakci iontů mědi (Cu+) vzniká oxidací peptidových vazeb Folinovým–Cioc alteuovým činidlem.
Assay je analytická technika, která pomáhá charakterizovat hlavní funkční složky vzorku. Test tedy může být buď kvalitativní, nebo kvantitativní test. Mnoho oborů včetně laboratorní medicíny, farmakologie, biologie životního prostředí, molekulární biologie, biochemie a imunologie tento druh testů běžně používá. Bradfordův a Lowryho proteinový test jsou dva biochemické testy, které určují koncentraci proteinu v roztoku vzorku. Oba testy používají k poskytnutí výsledků kolorimetrické techniky.
Co je Bradford Protein Assay?
Bradfordský proteinový test je rychlý spektroskopický analytický postup pro analýzu proteinů. Vykazuje vysokou přesnost při měření koncentrace proteinu v roztoku. Marion Bradford zavedla tento postup v roce 1976. V tomto testu je celková reakce založena na aminokyselinovém složení měřených proteinů. Jinými slovy, Bradfordův proteinový test je kolorimetrický test. Používá barvivo Coomassie brilantní modř. Tento kolorimetrický proteinový test tedy závisí na posunu absorbance barviva. Coomassie brilantní modř G-250 existuje ve třech formátech: kationtový (červený), aniontový (modrý) a neutrální (zelený). Během kyselých podmínek se červená forma barviva přemění na modrou. Potvrzuje vazbu proteinu. Pokud protein není přítomen, roztok může zůstat hnědý.
Obrázek 01: Bradfordův proteinový test
Bradfordský proteinový test se liší od jiných proteinových testů, protože je méně citlivý na interference různých chemických sloučenin přítomných v proteinovém roztoku. Tyto sloučeniny zahrnují sodík, draslík, glukózu a sacharózu atd.
Co je to Lowry Protein Assay?
Lowry protein assay je biochemický test používaný ke stanovení celkové hladiny proteinu v roztoku. Oliver H. Lowry je osobou, která vyvinula toto činidlo v roce 1940. Postup zobrazuje celkovou koncentraci proteinu v roztoku změnou barvy, která je úměrná koncentraci proteinu v roztoku. Jedná se tedy také o kolorimetrický proteinový test.
Základem tohoto postupu je reakce mezi ionty mědi (Cu+) vzniklými oxidací peptidových vazeb a Folin-Cioc alteuovým činidlem. Toto činidlo také obsahuje kyselinu fosfomolybdenovou a kyselinu fosfor-wolframovou. Nicméně reakční mechanismus Lowryho proteinového testu není dobře objasněn. Ale zahrnuje oxidaci zbytků cysteinu, tryptofanu a tyrosinu redukcí Folin-Cioc alteuova činidla.
Obrázek 02: Lowryho proteinový test
Cysteinové zbytky přispívají k absorbanci pozorované v Lowryho proteinovém testu a výsledkem reakce je zářivě modrá molekula; heteropoly molybdenová modř. Redukce této molekuly se měří absorbancí při 660 nm. Koncentrace cysteinových a tryptofanových zbytků, která redukovala Folin-Cioc alteuovo činidlo, tedy vyvozuje celkovou koncentraci proteinu v roztoku.
Jaké jsou podobnosti mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem?
- Bradfordovy a Lowryho proteinové testy určují koncentraci proteinu v roztoku.
- Obě metody jsou kolorimetrické metody.
- Také citlivost obou metod je vysoká.
Jaký je rozdíl mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem?
Bradfordův a Lowryho proteinový test jsou dva typy testů, které určují koncentraci proteinu v roztoku. Bradfordův proteinový test spoléhá na posun absorbance barviva Coomassie brilantní modř G-250, zatímco Lowryho proteinový test závisí na reakci iontů mědi produkovaných oxidací peptidových vazeb s Folin-Cioc alteuovým činidlem. Toto je klíčový rozdíl mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem. Bradfordův proteinový test trvá 15 minut, než poskytne výsledek, zatímco Loweryho proteinový test trvá 40-60 minut, než se dosáhne výsledku. Toto je další rozdíl mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem. Kromě toho je Bradfordův proteinový test závislý na složení aminokyselin, zatímco Lowryho proteinový test je částečně závislý na složení aminokyselin. Proto je to také rozdíl mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem.
Níže inforaphic poskytuje další podrobnosti o rozdílu mezi Bradfordovým a Lowryho proteinovým testem.
Shrnutí – Bradford vs Lowry Protein Assay
Assay je analytická technika používaná k charakterizaci hlavní funkční složky vzorku. Bradfordův a Lowryho proteinový test jsou dva typy proteinových testů, které fungují v rámci kolorimetrických technik. Bradfordův i Lowryho proteinový test určují koncentraci proteinu v roztoku. Klíčový rozdíl mezi Bradfordovým a Lowry Protein Assay však spočívá v kolorimetrické technice, kterou používají. Bradfordův proteinový test používá Coomassie brilantní modř G-250, zatímco Lowryho proteinový test používá ionty mědi (Cu+) a Folin-Cioc alteuovo činidlo. Kromě toho Bradfordova metoda poskytuje rychlé výsledky než Lowryho proteinový test. Obě metody jsou však vysoce citlivé metody a podléhají interferencím různých látek.
