Klíčový rozdíl mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk je ten, že celkový počet buněk odhaduje všechny buňky včetně živých i mrtvých mikrobiálních buněk ve vzorku, zatímco počet životaschopných buněk odhaduje pouze živé mikrobiální buňky ve vzorku.
Počítání počtu organismů v populaci je považováno za nezbytné pro většinu experimentálních prací. Proto se snažíme analyzovat počet mikrobů ve vzorku pomocí přímých a nepřímých metod. Přímá měření zahrnují metody, které přímo počítají počty buněk. Nepřímá měření zahrnují měření některých parametrů, které mohou souviset s počtem buněk, jako je hustota buněk, suchá hmotnost atd. Některé metody kvantifikují pouze živé mikrobiální buňky ve vzorku. Jednou z takových metod je počet životaschopných buněk. Přímé mikroskopické počty kvantifikují všechny buňky ve známém objemu média/vzorku pomocí mikroskopu. Proto počítá živé i mrtvé buňky. Je to typ celkového počtu buněk.
Co je celkový počet buněk?
Celkový počet buněk je metoda, která zahrnuje počítání všech buněk ve známém objemu média/vzorku pomocí mikroskopu a počítací komůrky (hemocytometru). Na rozdíl od počtu životaschopných buněk se počítají živé i mrtvé buňky. Jedná se tedy o celkový počet, pokud není během pozorování aplikováno barvení životaschopnosti. V mikroskopii jsou buňky pozorovány přímo pod mikroskopem a počítány. Využívá buněčnou suspenzi, která se skládá z mikrobiálních buněk. Pro usnadnění počítání a přesných měření lze vzorek zředit. Při velmi vysokých/nízkých koncentracích buněk je získání celkového počtu buněk pomocí mikroskopu obtížným úkolem.
Obrázek 01: Počítací komora – hemocytometr
Počítací komůrky jsou snadné, levné a rychlé při zjišťování celkového počtu buněk. Nejdůležitější je, že počítací komory jsou užitečné pro počítání eukaryot i prokaryot. Počítáme buňky ve vybraných čtvercích známého objemu, abychom kvantifikovali celkový počet buněk.
Co je počet životaschopných buněk?
Počítání životaschopných buněk je metoda počítání živých mikrobiálních buněk ve vzorku. Počítá pouze živé buňky ve vzorku. Počítání životaschopných buněk, membránová filtrace a nejpravděpodobnější počet je málo technik počítání životaschopných buněk. Tyto přístupy jsou založeny na růstu. Metoda počítání živých ploten je výkonná metoda používaná v mnoha mikrobiologických oblastech, včetně mikrobiologie potravin a mléčných výrobků, lékařské mikrobiologie, mikrobiologie životního prostředí, mikrobiální genetiky, vývoje růstových médií a biotechnologie.
Nejběžnějším způsobem, jak spočítat životaschopné bakterie, je použít vzorek schopný tvořit kolonie na agarovém médiu. Existují dva hlavní způsoby, jak provést počítání talířů: technika rozprostřeného talíře a technika polévacího talíře. Známý objem vzorku lze buď rozprostřít na povrch agarové plotny, nebo vmíchat do agaru. Miska se poté inkubuje a spočítají se vznikající kolonie. Počet kolonií souvisí s počtem mikroorganismů v původním vzorku. Životaschopné počty měří pouze ty buňky, které jsou živé a rostou.
Obrázek 02: Počet životaschopných desek
Nejpravděpodobnější počet (MPN) je alternativou k metodám počítání destiček pro odhad hustoty populace životaschopných buněk. Počítá organismy rostoucí v kapalné kultuře a jedná se tedy převážně o bakteriologickou techniku. Je zvláště užitečný pro nízké koncentrace organismů, např. mléko, pitná voda.
Technika membránové filtrace je vhodnější, když jsou mikroby velmi zředěné, jako je tomu v městském zásobování vodou. Provádí se jednoduše průchodem známého objemu kapaliny přes filtr a inkubací na živném médiu. Kolonie, které se vyvinou na filtru, se spočítají a vypočítá se počet bakterií na mililitr vzorku.
Jaké jsou podobnosti mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk?
- Celkový počet buněk a počet životaschopných buněk jsou dva typy mikrobiálních technik, které kvantifikují buňky.
- Jsou běžně používané techniky počítání v mikrobiologických laboratořích.
Jaký je rozdíl mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk?
Celkový počet buněk uvádí všechny živé a mrtvé mikrobiální buňky ve vzorku. Naproti tomu počet životaschopných buněk vypočítává pouze živé buňky ve vzorku. Toto je klíčový rozdíl mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk. Celkový počet buněk je nezávislý na růstu kolonií na agarových plotnách, zatímco počet životaschopných buněk je technika založená na růstu a závisí na růstu mikrobiálních kolonií na agarových plotnách.
Informační grafika níže shrnuje rozdíl mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk.
Shrnutí – Celkový počet buněk vs počet životaschopných buněk
Celkový počet buněk uvádí živé i mrtvé mikrobiální buňky, zatímco počet životaschopných buněk uvádí pouze živé buňky. Toto je klíčový rozdíl mezi celkovým počtem buněk a počtem životaschopných buněk. Také počet životaschopných buněk je technika založená na růstu, na rozdíl od celkového počtu buněk. Kromě toho vyžaduje inkubaci misek, dokud nezískáte viditelné kolonie. Počet životaschopných destiček, MPN a membránová filtrace jsou několik technik počítání životaschopných buněk, zatímco přímá mikroskopie a použití hemocytometru jsou dvě techniky celkového počtu buněk.
