Klíčový rozdíl mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem je ten, že kolorimetrický test určuje koncentraci barevných sloučenin v roztoku, zatímco fluorometrický test určuje kinetický mechanismus roztoku.
Biochemický test je technika, která analyticky detekuje nebo kvantifikuje aktivitu biologické molekuly nebo látky. Je to proces in vitro. Kolorimetrický test a fluorometrický test jsou dva typy běžných biochemických testů prováděných v laboratořích. Více technik, jako je ELISA a western blotting, jsou také komplexní biochemické testy pro kvantifikaci metabolické aktivity a měření funkčního chování biomolekul, jako jsou proteiny, enzymy a další malé molekuly. Tyto typy testů se používají k identifikaci interakcí protein-DNA, protein-RNA a protein-protein.
Co je kolorimetrický test?
Kolorimetrický test je technika, která určuje koncentraci barevných sloučenin v roztoku. Jinými slovy, kolorimetrický test je reakce, která vede ke změně barvy v důsledku enzymatické nebo chemické reakce mezi činidly a analyty. Kolorimetrické testy se v biochemii používají k testování enzymů, specifických sloučenin, hormonů, protilátek a dalších analytů. Používají kolorimetry nebo spektrofotometry. Kolorimetry jsou přístroje, které charakterizují barevné vzorky za účelem poskytnutí objektivního měření barevných charakteristik. Spektrofotometr je zařízení, které měří intenzitu světla jako funkci barvy nebo vlnové délky světla.
Obrázek 01: Kolorimetrický test
Jak funguje kolorimetrický test?
V kolorimetrickém testu se připraví destička s konkrétní protilátkou navázanou na jamky. Poté se přidá vzorek. To může umožnit vzorku vázat se na protilátku. Poté se do jamek přidá detekční protilátka a substrát, aby reagovaly s detekční sondou. Stop roztok se přidá na konci před čtením. Prázdná jamka nazývaná blank je ponechána bez vzorku. V kolorimetrickém testu platí, že čím tmavší barva, tím vyšší je koncentrace analytu. K měření obvykle stačí pouze jedna vlnová délka. Pokud však existuje referenční měření, použijí se dvě nebo více vlnových délek.
Co je to fluorometrický test?
Fuorometrický test je technika, která určuje kinetický mechanismus enzymových reakcí. Fluorometrický test se provádí s tvorbou fluorescenčního produktu z nefluorescenčního substrátu nebo naopak. Tento test také využívá přenos energie fluorescenční rezonancí (FRET), kde enzymatická reakce mění polohu dvou fluoroforů v substrátu a tím mění intenzitu fluorescence.
Obrázek 02: Fluorometrický test
Fluorometrické testy jsou obecně mnohem citlivější než jiné testy. Odhady diagnostických enzymů ve vzorcích tkání, buněk nebo tekutin pacientů se zvyšují díky jejich vyšší citlivosti.
Jak funguje fluorometrický test?
Při fluorometrickém testu se ke vzorku na destičce přidá substrát a pomocí čtečky destiček se odečte fluorescenční odpověď. Zde se měří každá buňka zvlášť. Neprůhledné destičky se používají ve fluorometrických testech. Tím se snižuje rozptyl světla. Pro tento typ testu jsou nutné dvě vlnové délky. Jedna vlnová délka je pro detekci excitace a druhá vlnová délka je pro emisi.
Jaké jsou podobnosti mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem?
- Kolorimetrický test a fluorometrický test jsou dva typy biochemických testů.
- Oba testy se provádějí pro lékařskou diagnostiku.
- Tyto testy zahrnují enzymatickou reakci.
- Oba testy zahrnují substrát a analyty.
Jaký je rozdíl mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem?
Kolorimetrický test je technika, která určuje koncentraci barevných sloučenin v roztoku, zatímco fluorometrický test je technika, která určuje kinetický mechanismus enzymových reakcí. Toto je klíčový rozdíl mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem. Navíc jsou fluorometrické testy citlivější než kolorimetrické testy; takže fluorometrické testy mají schopnost detekovat více analytů. Toto je další důležitý rozdíl mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem. Kromě toho fluorometrické testy vyžadují dvě vlnové délky, zatímco kolorimetrické testy se provádějí s jednou vlnovou délkou.
Níže uvedená infografika uvádí další rozdíly mezi kolorimetrickým a fluorometrickým stanovením.
Shrnutí – Kolorimetrický vs. Fluorometrický test
Biochemický test je analytický proces používaný ke stanovení a kvantifikaci buněčných metabolických reakcí. Kolorimetrický test a fluorometrický test jsou dva typy biochemických testů. Kolorimetrický test je reakce, která vede ke změně barvy v důsledku enzymatické nebo chemické reakce mezi činidly a analyty, zatímco fluorometrický test je technika, která se používá ke stanovení kinetického mechanismu enzymových reakcí. Oba testy závisí na enzymatické reakci, která zahrnuje substrát a analyt. Fluorometrické testy jsou citlivější než kolorimetrické testy. Nejdůležitější je, že fluorometrické testy vyžadují dvě vlnové délky, zatímco kolorimetrické testy lze provádět pouze s jednou vlnovou délkou. Toto shrnuje rozdíl mezi kolorimetrickým a fluorometrickým testem.
