Klíčový rozdíl mezi BL21 a DH5 Alpha je v tom, že BL21 je geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s deficitem proteázy používaná primárně pro expresi proteinů, zatímco DH5 Alpha je geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s mutací recA1 používanou především pro plazmidovou transformaci.
E. coli je jedním ze slavných organismů volby pro produkci rekombinantních proteinů. V průběhu let se stala nejoblíbenější platformou pro vyjadřování. Používá se také jako buněčná továrna. BL21 a DH5 Alpha jsou dvě buňky E. coli upravené genetickým inženýrstvím, které se v současnosti používají pro expresi proteinů a transformaci plazmidu, v daném pořadí.
Co je BL21?
BL21 je geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s deficitem proteázy primárně používaná pro expresi proteinů. E. coli BL21 je bakteriální buňka odvozená z kmene B. Má defekty Lon proteázy a ompT proteázy vnější membrány. Běžně se používá pro expresi rekombinantního proteinu, protože normálně dodává exprimovaným proteinům stabilitu. BL21 je použitelný pro proteinovou expresi s pCold I-IV DNA a pCold TF DNA. Ale tato kompetentní buňka E. coli není určena pro proteinový expresní systém využívající T7 promotor, jako je pET systém. Důvodem je, že BL21 neexprimuje T7 RNA polymerázu. Navíc se nedoporučuje používat pro konstrukci nebo přípravu plazmidu, protože nemá recA mutaci.
Obrázek 01: BL21
BL21 byl poprvé popsán Studierem v roce 1986 po různých modifikacích B linie. Buňky BL21 mají nedostatek proteázy LON, která degraduje mnoho cizích proteinů. Dále postrádá další gen, který kóduje proteázu vnější membrány (OmpT), jejíž funkcí je degradovat extracelulární proteiny. Nedostatek těchto proteinů spouští úspěšnou produkci cizího proteinu v buňkách E. coli BL21. Navíc mutace hsdSB v těchto buňkách zabraňuje metylaci cizí DNA a narušení v buňkách BL21.
Co je DH5 Alpha?
DH5 Alpha je geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s mutací recA1, která se primárně používá pro transformaci plazmidu. Buňky DH5 Alpha E. coli jsou geneticky upraveny americkým biologem Douglasem Hanahanem s cílem maximalizovat účinnost transformace. Buňka DH5 Alpha má tři různé mutace: recA1, endA1 a lacZAM15. recA1 je jednobodová mutace, která nahrazuje glycin 160 a zbytek kyseliny asparagové v polypeptidu recA. Tato mutace deaktivuje aktivitu rekombináz a inaktivuje homologní rekombinaci. mutace endA1 inaktivuje intracelulární endonukleázu, která jí brání degradovat vložený plazmid.
Obrázek 02: DH5 Alpha
Mutace lacZΔM15 navíc umožňuje modro-bílý screening transformovaných buněk. Tyto buňky jsou kompetentní buňky. Často se používají s transformací chloridem vápenatým k vložení požadovaného plazmidu. Nedávným výzkumem bylo zjištěno, že buňka DH5 Alpha s metodou Hanahan byla nejúčinnější kompetentní buňkou pro transformaci plazmidu.
Jaké jsou podobnosti mezi BL21 a DH5 Alpha?
- BL21 a DH5 Alpha jsou dvě geneticky upravené E.coli
- Obě jsou kompetentní buňky.
- Skládají se z odlišných mutací.
- Oba nemají přirozené prostředí.
- Používají se pro laboratorní účely, jako jsou expresní studie a klonovací postupy.
Jaký je rozdíl mezi BL21 a DH5 Alpha?
BL21 je geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s deficitem proteázy primárně používaná pro expresi proteinů. Na druhé straně je DH5 Alpha geneticky upravená kompetentní buňka E. coli s mutací recA1 primárně používaná pro transformaci plazmidu. Toto je klíčový rozdíl mezi BL21 a DH5 Alpha. Kromě toho buňka BL21 E. coli nemá mutaci recA1, zatímco buňka DH5 Alpha E. coli má mutaci recA1.
Následující infografika uvádí rozdíly mezi BL21 a DH5 Alpha v tabulkové formě.
Shrnutí – BL21 vs DH5 Alpha
Nepatogenní kmeny E. coli jsou geneticky vyvinuty vědci pro laboratorní expresní studie a klonovací účely. BL21 a DH5 Alpha jsou dvě buňky E. coli upravené genetickým inženýrstvím. BL21 se primárně používá pro studie exprese proteinů. Na druhé straně se DH5 Alpha primárně používá pro účely transformace plazmidu. Toto je shrnutí rozdílu mezi BL21 a DH5 Alpha.
