Klíčový rozdíl mezi kvasinkami s jedním hybridem a kvasinkami se dvěma hybridy je v tom, že kvasinky s jedním hybridem jsou testy založené na in vitro analýze interakcí DNA-protein, zatímco dvouhybridní kvasinky jsou testy založené na in vitro analýze interakcí protein-protein.
Studium interakcí mezi buněčnými molekulami může pomoci definovat rozpoznávací místa zapojená do genové exprese a proteinových drah. Interakce DNA a proteinů jsou nedílnou součástí buněčných procesů, jako jsou modifikace DNA a regulace transkripce atd. Na druhé straně interakce proteinů a proteinů hrají zásadní roli v buněčných procesech, jako je replikace, transkripce, translace a transdukce signálu. Proto je kriticky důležité identifikovat tyto interakce buněčných molekul pomocí různých testů. Kvasinkový jeden hybrid a kvasinkový dvouhybrid jsou dva in vitro testy pro analýzu interakcí DNA-protein a protein-protein.
Co je Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) je in vitro test pro analýzu intracelulárních interakcí DNA-protein. Tato metoda byla poprvé zavedena Wangem a Reedem v roce 1993. Od té doby prokázala větší sílu v biologickém výzkumu. V tomto testu jsou dvě hlavní složky: DNA návnada a proteinová kořist.
Obrázek 01: Yeast One Hybrid
V postupu je sekvence DNA (návnada DNA) nejprve klonována před dvěma různými reportéry (HIS3, LacZ). Tyto reportérové konstrukty jsou integrovány do genomu kvasinkového kmene. Transkripční faktory jsou brány jako proteinová kořist. Transkripční faktory jsou fúzovány s transkripční aktivační doménou (AD) kvasinkového Gal4 transkripčního faktoru za účelem vytvoření hybridních proteinů. Celý tento hybridní protein je integrován do plazmidu před jeho zavedením do kvasinkového kmene. Po zavedení rekombinantního plazmidu, když transkripční faktor interaguje s DNA fragmentem, AD část aktivuje expresi reportérového genu (HIS3 nebo LacZ). Sekvenování plazmidů umožňuje identifikaci transkripčního faktoru, který se může vázat na fragment DNA. Nedávno byla k výzkumu diagnostiky onemocnění použita metoda kvasinky one hybrid. Proto bude tento test v budoucnu více používán ve vědeckém výzkumu a lékařské léčbě.
Co je Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) je in vitro test pro analýzu intracelulárních proteinových a proteinových interakcí. Tuto metodu původně objevili Stanley Fields a Ok-Kyu Song v roce 1989. Tato technika detekuje interakce protein-protein pomocí Gal4 transkripčního faktoru kvasinek.
Obrázek 02: Yeast Two Hybrid
Při této metodě se nejprve zkonstruují dvě fúze (hybridy) s použitím požadovaných proteinů: fúzí jednoho proteinu s DNA vazebnou doménou (DBD) a fúzí druhého proteinu s aktivační doménou (AD) transkripčního faktoru Gal4. Protein fúzovaný s DBD je známý jako návnada, zatímco protein fúzovaný s AD je známý jako kořist. V kvasinkovém kmeni jsou po interakci návnady a kořisti DBD a AD přivedeny do těsné blízkosti, aby se vytvořil funkční transkripční faktor Gal4 upstream od reportérového genu. Funkční transkripční faktor aktivuje expresi reportérového genu. Kromě toho se tato metoda v současnosti používá ke screeningu interakcí integrálních membránových proteinů v savčích buňkách.
Jaké jsou podobnosti mezi Yeast One Hybrid a Yeast Two Hybrid?
- Kvasinkový jeden hybrid a kvasinkový dvouhybrid jsou dva in vitro testy pro analýzu interakcí DNA-protein a protein-protein.
- Tyto testy používají kvasinkové kmeny.
- Oba testy používají aktivační doménu (AD) transkripčního faktoru Gal4.
- K detekci interakcí používají expresi reportérového genu (HIS3 nebo LacZ).
- Mají návnadu a kořist.
- Oba testy jsou velmi užitečné v moderním biologickém výzkumu.
Jaký je rozdíl mezi Yeast One Hybrid a Yeast Two Hybrid?
Yeast one hybrid je in vitro test pro analýzu interakcí DNA a proteinů, zatímco kvasinkový dvou hybrid je in vitro test pro analýzu interakcí proteinů a proteinů. Toto je klíčový rozdíl mezi kvasinkami s jedním hybridem a kvasinkami se dvěma hybridy. Dále, u kvasinkového hybridu je návnada fragment DNA a kořist je molekula proteinu. Na druhou stranu, u dvou hybridů kvasinek jsou návnada i kořist molekuly bílkovin.
Níže uvedená infografika uvádí rozdíly mezi kvasinkami s jedním hybridem a kvasinkami se dvěma hybridy v tabulkové formě pro srovnání vedle sebe.
Shrnutí – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Kvasnice jeden hybrid a kvasinky dvouhybrid jsou dvě důležité in vitro analýzy. Kvasinkový hybrid je in vitro test pro analýzu interakcí DNA a proteinů, zatímco kvasinkový dvouhybrid je in vitro test pro analýzu interakcí proteinů a proteinů. Toto je klíčový rozdíl mezi kvasinkami s jedním hybridem a kvasinkami se dvěma hybridy.
