Klíčový rozdíl mezi mikronukleovým a kometovým testem je ten, že mikronukleový test je důležitý pro kontrolu poškození chromozomů v důsledku expozice mutagenu, zatímco kometový test je důležitý pro detekci primárního poškození DNA v jednotlivých buňkách.
Testy genotoxicity pomáhají posoudit možnosti mutací a chromozomálních abnormalit. Genotoxiny zahrnují chemické látky a záření. Karcinogeny, mutageny a teratogeny jsou hlavní kategorie genotoxinů. Způsobují různá poškození, jako jsou bodové mutace, delece, jedno a dvouvláknové zlomy, chromozomální aberace, formace mikrojader, opravy DNA a interakce buněčného cyklu. Takové stavy mohou vést k široké škále onemocnění a testy genotoxicity zabraňují potenciálnímu poškození těmito stavy. Mikronukleový test a kometový test jsou dvě techniky v rámci testů genotoxicity.
Co je to Micronucleus Assay?
Micronucleus assay je test k posouzení poškození chromozomů v důsledku expozice mutagenu. Je důležitý při screeningu chemikálií, které způsobují tvorbu vřeténka a mikrojader. Mikronukleový test poskytuje informace o stabilitě chemikálií při interferenci se strukturou a funkcí chromozomů. Mnoho karcinogenů je pozitivních v mikronukleárních testech. Proces testu zahrnuje chemické ošetření a měření frekvence mikronukleárních buněk. Pokud dojde k abnormálnímu zvýšení počtu buněk mikrojader, dojde k závěru, že chemická látka vyvolává poškození chromozomů.
Mikronukleární test se obvykle provádí na aktivně se dělicích buňkách. Proto jsou erytrocyty a kmenové buňky kostní dřeně produkované buněčným dělením ideálními kandidáty pro takové testy. Zažívají neustálý a rychlý obrat. Protože erytrocyty nemají žádná skutečná jádra, mikrojaderné buňky jsou na konci testu viditelnější.
Obrázek 01: Pozorování mikrojaderného testu
Micronucleus testy jsou ekonomické, rychlejší, pohodlné a vyžadují méně dovedností. Rychle a spolehlivým způsobem odrážejí chromozomální aberace a jsou mimořádně užitečné pro rychlé posouzení chromozomálních poškození. Speciálním a všestranným typem mikronukleárního testu je cytokinetický blokový mikronukleový cytom (CBMNcyt). Je to preferovaný test pro měření chromozomálního poškození a nestability v buňkách. Hlavním problémem použití mikronukleárního testu je však to, že není schopen určit různé typy chromozomálních aberací a test má vliv na mitotickou rychlost a podíl buněčné smrti, což způsobuje změnu výsledků.
Co je Comet Assay?
Assay Comet, která je také známá jako jednogelová elektroforéza, je jednoduchá a citlivá technika pro detekci poškození DNA. Měří zlomy DNA v eukaryotických buňkách a je standardní technikou pro biomonitoring a testování genotoxicity.
Kometový test se podílí na zapouzdření buněk v suspenzích agarózy s nízkou teplotou tání, lýze buněk v neutrálních nebo alkalických podmínkách a elektroforéze suspendovaných lyžovaných buněk. Během procesu enkapsulace jsou buňky suspendovány v roztavené agaróze s nízkou teplotou tání a agaróza tvoří matrici sacharidových vláken, která je ukotví na místě. Agaróza je osmoticky neutrální; proto umožňuje roztokům pronikat gelem a působit na buňky, aniž by je narušoval a posouval. Lyzační roztok je vysoce koncentrovaný vodný roztok soli a detergent. Tato sůl narušuje proteiny a vazebné vzorce v buňce a zároveň narušuje obsah RNA v buňce. Buňky ničí a všechny proteiny, RNA, cytoplazmatické a nukleoplazmatické složky, narušují a difundují do agarózové matrice a zanechávají DNA.
Obrázek 02: Comet Assay
Roztok pro elektroforézu je alkalický roztok, kde dvoušroubovice DNA denaturuje a nukleoid se stává jednovláknovým. Během tohoto procesu je k analýze snímků aplikováno elektrické pole. Analýza obrazu měří celkovou intenzitu fluorescence pro DNA a nukleoid a porovnává je. Celková struktura připomíná kometu s kruhovou hlavou odpovídající zbývající nepoškozené DNA a ohonem pro poškozenou DNA. Čím jasnější a delší je ocas díky silnějším signálům, tím vyšší je úroveň poškození.
Jaké jsou podobnosti mezi mikronukleovým a kometovým testem?
- Micronucleus a kometový test jsou ekonomické, rychlejší, pohodlné a vyžadují méně dovedností.
- Provádějí se hlavně na DNA.
- Oba testy pomáhají při hodnocení mutací a chromozomálních abnormalit.
- Obě techniky navíc používají k provedení postupu chemikálie.
Jaký je rozdíl mezi mikronukleovým a kometovým testem?
Mikronukleový test je důležitý při kontrole poškození chromozomů v důsledku expozice mutagenu, zatímco kometový test je důležitý při detekci primárního poškození DNA v jednotlivých buňkách. Toto je klíčový rozdíl mezi mikronukleovým a kometovým testem. Mikronukleový test je také dobře zaveden pro detekci klastogenicity a aneugenity. Kometový test se používá jako test genotoxicity k detekci primárního poškození DNA v buňkách. Mikronukleový test navíc poskytuje informace o stabilitě chemikálií, zatímco kometový test je jednobuněčná gelová elektroforéza.
Níže uvedená infografika představuje rozdíly mezi mikronukleovým a kometovým testem v tabulkové formě pro srovnání vedle sebe.
Shrnutí – Micronucleus vs Comet Assay
Testy genotoxicity pomáhají posoudit možnosti mutací a chromozomálních abnormalit. Mikronukleový test a kometový test jsou dvě techniky v rámci testů genotoxicity. Micronucleus test hodnotí poškození chromozomů jako důsledek expozice mutagenu. Kometový test je jednoduchá a citlivá technika pro detekci poškození DNA. Toto je klíčový rozdíl mezi mikronukleovým a kometovým testem. Mikronukleový test je důležitý při screeningu chemikálií, které způsobují tvorbu vřeténka a mikrojader. Kometový test se podílí na zapouzdření buněk v suspenzích agarózy s nízkou teplotou tání, lýze buněk v neutrálních nebo alkalických podmínkách a elektroforéze suspendovaných lyžovaných buněk.
