Klíčový rozdíl mezi gelovou filtrací a afinitní chromatografií je ten, že gelová filtrační chromatografie závisí na rozdílech v molekulové hmotnosti nebo velikosti vzorku analytu, zatímco afinitní chromatografie závisí na afinitě analytu k imobilizovanému ligandu.
Pojem chromatografie v analytické chemii označuje proces separace složek ve směsi za použití různých technik. Chromatografie je souhrnný název, který představuje různé množství různých metod separace.
Co je gelová filtrační chromatografie?
Gelová filtrační chromatografie je analytická technika, ve které separace složek závisí na rozdílu v molekulové hmotnosti nebo velikosti. Tato technika je také známá jako vylučovací chromatografie nebo chromatografie s molekulovým sítem. Separační technika v tomto procesu závisí na různé schopnosti molekul ve vzorku vstupovat do pórů gelového filtračního média.
V technice gelové filtrace obsahuje stacionární fáze kuličky hydratovaného houbovitého materiálu s póry molekulárních rozměrů obsahujících úzký rozsah velikostí. Pokud kolonou obsahující tato „molekulární síta“propustíme vodný roztok skládající se z molekul různých velikostí, molekuly, které jsou větší než póry filtračního média, se kolonou rychle pohybují. Naproti tomu menší molekuly vstupují do pórů gelu a mají tendenci se pomalu pohybovat kolonou. Molekuly se eluují z kolony v pořadí klesající velikosti molekul. Zde je vylučovací limit gelu molekulová hmotnost nejmenších molekul neschopných proniknout póry daného gelu.
Existují různé typy technik gelové filtrace, jako je metoda nepřímé gelové filtrace, gelová filtrace v ustáleném stavu, dialýza gelových perliček atd. Nepřímá gelová filtrační chromatografie je užitečná při stanovení volných hormonů štítné žlázy. Gelová filtrační chromatografie v ustáleném stavu je nepřímá technika užitečná především pro měření volných steroidů, jako je kortizol, testosteron atd. Dialýza gelových perliček je na druhé straně modifikací ustálené gelové filtrace, která je poměrně jednodušší.
Co je afinitní chromatografie?
Afinitní chromatografie je analytická technika a separační metoda, která závisí na specifické vazebné interakci mezi imobilizovaným ligandem a jeho vazebným partnerem. Některé příklady zahrnují vazbu protilátka-antigen, vazbu enzym-substrát a vazbu enzym-inhibitor. Proto má tato technika mnoho důležitých aplikací při čištění nukleových kyselin, čištění proteinů z buněčných extraktů a čištění krve.
U této techniky je nejdůležitější vlastností imobilizace ligandu. K tomu můžeme použít různé materiály jako jsou akryláty a silikagel. Je důležité zabránit sterické interferenci cílové molekuly s ligandem. Kromě toho je k pevné fázi připojen inhibitor. Tento inhibitor nazýváme spacer. Klasicky se spacer skládá z uhlovodíkového řetězce.
Stacionární fáze afinitní chromatografie obsahuje jádro, spacer a ligand. Někdy má také kovový iont, který je spojen s ligandem. Nejvýhodnější pevnou fází pro stacionární fázi v této technice je agarózový gel, protože se snadno dávkuje k naplnění a naplnění kolony pryskyřičnými lůžky jakékoli velikosti a je dostatečně velký, aby biomolekuly volně proudily do kuliček a skrz nich. Ligandy se mohou kovalentně vázat na kuličkový polymer různými způsoby. Nejběžnějšími distančními sloučeninami jsou bromkyan, epoxid, epoxid s C6 kyselinou a diamin. Na druhou stranu, ligand, který můžeme použít, se liší podle cíle, např. protilátka-antigen, ionty železa nebo hliníku-fosfoproteiny, avidin-biotin, glutathion-GST, proteiny označené chelátorem-His atd.
Jaký je rozdíl mezi gelovou filtrací a afinitní chromatografií?
Chromatografie je důležitou analytickou technikou. Gelová filtrační chromatografie a afinitní chromatografie jsou dvě důležité varianty chromatografie. Klíčový rozdíl mezi gelovou filtrací a afinitní chromatografií je ten, že gelová filtrační chromatografie závisí na rozdílech v molekulové hmotnosti nebo velikosti vzorku analytu, zatímco afinitní chromatografie závisí na afinitě analytu k imobilizovanému ligandu.
Shrnutí – Gelová filtrace vs afinitní chromatografie
Existují různé typy chromatografických technik podle jejich použití a povahy vzorku analytu. Gelová filtrace a afinitní chromatografie jsou dva takové typy technik. Klíčový rozdíl mezi gelovou filtrací a afinitní chromatografií je ten, že gelová filtrační chromatografie závisí na rozdílech v molekulové hmotnosti nebo velikosti vzorku analytu, zatímco afinitní chromatografie závisí na afinitě analytu k imobilizovanému ligandu.
