Klíčový rozdíl – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleázy jsou nukleázy, které specificky degradují RNA na menší jednotky. Lze je rozdělit do dvou kategorií; endoribonukleázy a exoribonukleázy. Endoribonukleáza je endonukleáza, která může degradovat buď jednovláknovou nebo dvouvláknovou RNA. Štěpí fosfodiesterové vazby v polynukleotidovém řetězci RNA. Příklady jsou RNáza A, RNáza III, RNáza T1, RNáza P a RNáza H. Exoribonukleáza je exonukleáza, která degradovala RNA odstraněním koncových nukleotidů buď z 5' konce nebo 3' konce molekuly RNA. Příklady jsou RNáza R, RNáza II, RNáza D a RNáza PH. Klíčový rozdíl mezi RNASE A a RNASE H je v tom, že RNáza A je pankreatická ribonukleáza, která specificky degraduje jednovláknovou RNA na menší složky, zatímco RNáza H je nespecifický enzym, který štěpí RNA v hybridu RNA-DNA na menší jednotky prostřednictvím hydrolytický mechanismus.
Co je RNASE A?
RNáza A je pankreatická ribonukleáza, která specificky štěpí nepárové zbytky cytosinu a uracilu na 3' konci jednovláknové RNA. RNáza H působí při vyšší koncentraci soli (0,3M nebo vyšší koncentrace NaCl). Hydrolytická reakce je dvoustupňová. Tvoří 3' fosforylovaný produkt přes 2', 3' cyklický monofosfátový meziprodukt. I když je specifický pro jednovláknovou RNA při vyšší koncentraci soli, může také degradovat dvouvláknovou RNA a RNA v hybridu RNA-DNA při nižší koncentraci NaCl (nižší než 0,3M NaCl).
Bruce Merrifield jako první syntetizoval tento enzym. RNáza A je velmi oblíbený enzym v molekulárním výzkumu. Bovinní pankreatická RNáza A je příkladem RNázy A. A je to jeden z nejodolnějších enzymů, které se používají v laboratoři. Tento enzym ke své aktivitě nepotřebuje kofaktor. Jedná se o vysoce termostabilní enzym. RNáza A je prvním enzymem a třetím proteinem, u kterého byla detekována správná aminokyselinová sekvence. Tento enzym je velmi malý se 124 aminokyselinami a molekulovou hmotností 12 600 da. A má čtyři histidinové zbytky (His 12 a His 119, které se účastní katalytické reakce).
Obrázek 01: The RNase A
RNáza A může být izolována varem surového vzorku. Když se vaří, všechny ostatní enzymy degradují zbývající RNázu A. RNáza A je úžasně stabilní enzym. Tento enzym inhibuje proteinem inhibitorem ribonukleázy, těžkými kovy a uridinvanadátovými komplexy.
Co je RNase H?
RNáza H je nespecifický ribonukleázový enzym, který může degradovat RNA v hybridu RNA-DNA prostřednictvím hydrolytické reakce. RNáza H štěpí 3'-O-P vazbu RNA v hybridu RNA-DNA. Nakonec produkuje 3'OH a 5' fosfátem zakončené produkty. Při replikaci DNA hraje klíčovou roli odstraněním primeru RNA po vytvoření nových řetězců DNA. V laboratorních podmínkách specificky degraduje RNA v hybridu RNA-DNA, ale ne DNA a nehybridizované RNA. A tento enzym se obvykle používá ke zničení templátu RNA poté, co se během syntézy cDNA vytvoří první komplementární řetězec DNA.
Obrázek 02: RNase H
RNáza H se také používá v testech ochrany nukleázy. Může být také začleněn k odstranění poly A konce z mRNA. RNáza H má schopnost zničit nekódující RNA uvnitř i vně buňky. Kovové ionty jsou vyžadovány jako kofaktory pro tuto proteinovou aktivitu. K inhibici enzymu RNázy H lze použít chelátor (EDTA).
Jaké jsou podobnosti mezi RNASE A a RNASE H?
- Oba jsou bílkovinné povahy.
- Oba jsou endoribonukleáza
- Obojí může degradovat RNA.
- Oba provádějí hydrolytické reakce.
- Molekulární laboratoře používají obojí.
Jaký je rozdíl mezi RNASE A a RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNáza A je pankreatická ribonukleáza, která specificky štěpí 3' konec nepárových zbytků cytosinu a uracilu jednovláknové RNA při vyšší koncentraci soli. | RNáza H je nespecifický ribonukleázový enzym, který může degradovat RNA v hybridu RNA-DNA prostřednictvím hydrolytické reakce. |
| Povaha štěpení RNA | |
| RNáza A specificky štěpí jednovláknovou RNA při vyšší koncentraci soli. | RNáza H štěpí RNA v hybridu RNA-DNA. |
| Potřeba kofaktorů pro aktivitu | |
| RNáza A nepotřebuje ke své činnosti kofaktory. | RNase H potřebuje ke své činnosti kovové ionty jako kofaktory. |
| Inhibitory proteinové aktivity | |
| Protein inhibitor ribonukleázy, těžké kovy a uridin-vanadičnanové komplexy inhibují aktivitu RNAsy A. | Chelátor (EDTA) inhibuje aktivitu RNázy H. |
| Odstranění primeru RNA při replikaci DNA | |
| RNáza A se nepoužívá k odstranění primeru RNA při replikaci DNA. | RNáza H se používá k odstranění primeru RNA při replikaci DNA |
| Odstranění šablony DNA v komplementární syntéze DNA (C-DNA) | |
| RNáza A se nepoužívá k odstranění templátu RNA během syntézy komplementární DNA (C-DNA). | RNáza H se používá k odstranění templátu RNA během syntézy komplementární DNA (C-DNA). |
| Odstranění Poly-A-Tail v mRNA hybridizované na oligo (dt) | |
| RNáza A se nepoužívá k odstranění „poly-A ocasu“v mRNA hybridizované s oligo (dt). | RNáza H se používá k odstranění „poly-A ocasu“v mRNA hybridizované s oligo (dt) |
Shrnutí – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleázy jsou nukleázové enzymy, které mají schopnost štěpit RNA na menší jednotky. Jsou to dva typy; endoribonukleázy a exoribonukleázy. Endoribonukleáza je endonukleáza, která má schopnost degradovat jednovláknovou nebo dvouvláknovou RNA. A štěpí fosfodiesterovou vazbu v polynukleotidovém řetězci RNA. RNáza A a RNáza H jsou dvě endoribonukleázy. RNáza A je pankreatická ribonukleáza, která specificky štěpí nepárové cytosinové a uracilové zbytky na 3' konci jednovláknové RNA při vyšší koncentraci soli. RNáza H je nespecifický ribonukleázový enzym, který může degradovat RNA v hybridu RNA-DNA prostřednictvím hydrolytické reakce. Toto je rozdíl mezi RNázou A a RNázou H.
Stáhněte si PDF RNASE A vs RNASE H
Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro offline účely podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi RNASE A a RNASE H
