Klíčový rozdíl mezi elektroporací a mikroinjekcí je v tom, že elektroporace je technika, která využívá vysokonapěťový elektrický pulz k dodání DNA do hostitelských buněk, zatímco mikroinjekce je technika, která používá k dodání DNA do buněk jehlu nebo mikropipetu s jemným hrotem. hostitelské buňky.
Transformace je proces, kterým se cizí DNA přenáší do hostitelských buněk. Transformací lze změnit genetickou výbavu organismu. Existují různé chemické, biologické a fyzikální transformační metody. Některé jsou přímé metody, zatímco některé jsou metody nepřímé. Elektroporace a mikroinjekce jsou dvě fyzikální metody, které jsou metodami přímé transformace. Elektroporace využívá elektrické pole k indukci mikroskopických pórů v biologických buněčných membránách za účelem začlenění DNA do hostitelských buněk. Mikroinjekce naproti tomu přímo dodává DNA pomocí mikropipety nebo skleněné jehly s jemným hrotem.
Co je elektroporace?
Elektroporace je transformační technika, která dodává DNA do rostlinných buněk a protoplastů. Tato technika využívá vysokonapěťový elektrický impuls. Rostlinné materiály se inkubují v roztoku pufru s DNA. Poté je roztok vystaven vysokonapěťovému elektrickému impulsu. V membránách rostlinných buněk se vytvářejí póry indukované vysokým napětím a prostřednictvím těchto pórů DNA migruje dovnitř buněk a integruje se s rostlinnou genomickou DNA. Účinnost této metody závisí na rostlinných materiálech a podmínkách ošetření.
Obrázek 01: Elektroporace
Když je transformace provedena pomocí elektroporace, pouze 40 až 50 % buněk obdrží DNA. Navíc při této metodě může přežít pouze 50 % transformovaných buněk. Tato metoda je však snadno proveditelná a nemění biologickou strukturu nebo funkci buněk. Navíc jej lze použít pro širokou škálu buněk.
Co je mikroinjekce?
Mikroinjekce je transformační technika, která je zvláště užitečná při zavádění DNA do velkých buněk. Tato metoda využívá skleněnou jehlu s jemným hrotem nebo mikropipetu k dodání DNA do rostlinných protoplastů nebo živočišných buněk (oocytů, vajíček a embryí). Ve skutečnosti je tato metoda vhodnější pro výrobu transgenních zvířat, jako jsou myši. Při této metodě je DNA inkorporována přímo do jádra nebo cytoplazmy.
Podobně jako elektroporace je mikroinjekce přímou transformační technikou. Mikroinjekce se provádí pod specializovaným nastavením mikroskopu. Počítačové řízení zadržovací pipety, jehly, stolku mikroskopu a video technologie zvýšilo účinnost této techniky. Při injekci DNA lze použít barvivo ke snadné identifikaci transformovaných buněk. Proto není potřeba používat samostatnou metodu k identifikaci transformovaných buněk. A co je nejdůležitější, postup mikroinjekce nevyžaduje markerový gen.
Obrázek 02: Mikroinjekce
Tato metoda je navíc velmi účinná a reprodukovatelná. Tato metoda je však nákladná, časově náročná a vyžaduje kvalifikované pracovníky. Touto metodou lze také ošetřit pouze malý počet buněk.
Jaké jsou podobnosti mezi elektroporací a mikroinjekcí?
- Elektroporace i mikroinjekce jsou dva typy transformačních technik.
- Tyto metody dodávají DNA do rostlinných buněk a protoplastů.
- Jsou to přímé metody.
- Jsou to navíc fyzikální nebo mechanické metody.
- Obě metody jsou užitečné při produkci transgenních rostlin a zvířat.
Jaký je rozdíl mezi elektroporací a mikroinjekcí?
Technika elektroporace využívá k zavedení DNA elektrické pole, zatímco technika mikroinjekce je mikropipeta nebo skleněná jehla s jemným hrotem k zavedení DNA. Toto je klíčový rozdíl mezi elektroporací a mikroinjekcí. Kromě toho se elektroporace většinou používá pro rostlinné buňky a protoplasty, zatímco mikroinjekce se většinou používá pro živočišné buňky. Kromě toho elektroporace není tak časově náročná jako mikroinjekce.
Níže uvedená infografika shrnuje rozdíly mezi elektroporací a mikroinjekcí ve formě tabulky.
Shrnutí – Elektroporace vs mikroinjekce
Elektroporace a mikroinjekce jsou dvě fyzikální metody přenosu genů. Elektroporace využívá vysokonapěťové elektrické pole, zatímco mikroinjekce využívá skleněnou jehlu nebo mikropipetu. Toto je klíčový rozdíl mezi elektroporací a mikroinjekcí. Obě metody však přímo zavádějí exogenní DNA do hostitelských buněk.
