Klíčový rozdíl mezi BCA a Bradfordovým testem je ten, že BCA test je časově náročný a méně přesný, zatímco Bradfordův test je rychlý a přesný.
BCA a Bradfordův test jsou dvě testovací metody stanovení koncentrace proteinu. Tyto dva testy mají odlišné principy testu a rozdíly v jejich přesnosti.
Co je test BCA?
BCA test nebo test bicinchoninové kyseliny je biochemický test užitečný pro stanovení celkové koncentrace proteinu v roztoku. Tato metoda je také pojmenována jako Smithova zkouška po jejím vynálezci Paulu K. Smithovi. Tato analytická metoda vykazuje podobnosti s Lowryho proteinovým testem, Bradfordovým proteinovým testem nebo biuretovým činidlem. Celkovou koncentraci proteinu v daném vzorku můžeme sledovat změnou barvy roztoku vzorku, která přechází ze zelené do fialové. K této barevné změně dochází úměrně obsahu bílkovin. Poté můžeme použít kolorimetrickou techniku k analýze intenzity barvy a obsahu bílkovin ve vzorku.
BCA metoda odhadu bílkovin
Pokud vezmeme v úvahu mechanismus stanovení BCA, typický roztok BCA obsahuje vysoce alkalický roztok s pH téměř 11,25 a složky v tomto roztoku zahrnují kyselinu bicinchonovou, uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, tartrát sodný a pentahydrát síranu měďnatého. Tento test primárně závisí na dvou chemických reakcích: redukci mědi(II) na měď(I) peptidovými vazbami v proteinu a chelaci dvou molekul kyseliny bicinchoninové s iontem mědi(I), což vede k purpurově zbarvenému komplexu, který může absorbuje světlo o vlnové délce 562 nm. V první reakci je množství mědi(II) redukované peptidovými vazbami úměrné množství proteinu ve vzorku.
Co je Bradford Assay?
Bradfordův test je spektroskopická analytická metoda užitečná při měření koncentrace proteinu v roztoku. Tato metoda byla vyvinuta Marion M. Bradfordovou v roce 1976 a je to poměrně rychlá a přesná metoda.
Barevná reakce proteinu a Bradfordova činidla
Tuto metodu můžeme použít ke stanovení koncentrace množství proteinu ve vzorku. Chemická reakce, která probíhá ve vzorku během tohoto testu, je výhradně závislá na aminokyselinovém složení proteinu ve vzorku.
Bradfordova metoda odhadu bílkovin
Pokud uvažujeme o metodě tohoto testu, jedná se o kolorimetrický proteinový test, který je založen na posunu absorbance barviva s názvem Coomassie Brilliant Blue G-250. Obecně toto barvivo existuje ve třech formách jako aniontová (modrá) forma, neutrální (zelená) forma a kationtová (červená) forma. Proto v kyselých podmínkách barvivo mění svou barvu z červené na modrou. To je způsobeno vazbou proteinu s barvivem. Naproti tomu, pokud se s barvivem nenaváže žádný protein, změna barvy se neprojeví, roztok získá červenohnědou barvu. Toto barvivo je schopno vytvořit silný, nekovalentní komplex s karboxylovou skupinou proteinu prostřednictvím Van der Waalových sil a elektrostatických přitažlivostí.
Jaký je rozdíl mezi BCA a Bradfordovým testem?
BCA a Bradfordův test jsou dvě testovací metody stanovení koncentrace proteinu. Tyto dva testy mají různé principy testu a rozdíly v jejich přesnosti. Klíčový rozdíl mezi BCA a Bradfordovým testem je ten, že BCA test je časově náročný a méně přesný, zatímco Bradfordův test je rychlý a přesný.
Následující infografika shrnuje rozdíly mezi BCA a Bradfordovým testem ve formě tabulky.
Shrnutí – BCA vs Bradford Assay
BCA test nebo test bicinchoninové kyseliny je biochemický test užitečný pro stanovení celkové koncentrace proteinu v roztoku. Bradfordův test je spektroskopická analytická metoda užitečná při měření koncentrace proteinu v roztoku. Klíčový rozdíl mezi BCA a Bradfordovým testem je ten, že BCA je časově náročný a méně přesný, zatímco Bradfordův test je rychlý a přesný.
