Klíčový rozdíl mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací je v tom, že imunoprecipitace je technika, která vysráží protein z roztoku pomocí specifické protilátky, zatímco koimunoprecipitace je technika, která vysráží intaktní proteinové komplexy z roztoku pomocí specifické protilátky.
Interakce antigen-protilátka je specifická chemická interakce mezi protilátkami produkovanými B buňkami a antigeny (proteiny) během imunitní reakce. Normálně se rozpustné antigeny kombinují s rozpustnými protilátkami v přítomnosti elektrolytu při rozpustné teplotě a pH za účelem vytvoření nerozpustného viditelného komplexu. Toto se nazývá srážecí reakce. Proto jsou imunoprecipitace a koimunoprecipitace dva typy srážecích reakcí, které se běžně používají v laboratořích k identifikaci proteinů, jako jsou antigeny.
Co je imunoprecipitace?
Imunoprecipitace je technika vysrážení proteinu z roztoku pomocí specifické protilátky. Někdy je tato technika známá také jako individuální proteinová imunoprecipitace. Imunoprecipitace používá protilátku k izolaci vybraného zájmového proteinu z buněčného lyzátu. Protilátka čistí svůj specifický cílový protein nebo antigen ze směsi. Protilátka se naváže na protein a komplex protilátka-antigen se vytáhne ze vzorku. V experimentálním uspořádání je komplex antigen-protilátka vytažen pomocí agarózy nebo magnetických kuliček spojených s proteinem A/G. Později se kuličky promyjí a sledovaný protein se eluuje. Purifikovaný protein nebo antigen získaný imunoprecipitací je ověřen řadou technik, jako je enzymatický imunosorbentní test (ELISA) a western blot (WB).
Obrázek 01: Imunoprecipitace
Kromě toho mohou být izolované proteiny nebo antigeny kvantifikovány a identifikovány pomocí hmotnostní spektrometrie za použití vzorů enzymatického štěpení na základě primární sekvence. Před zahájením imunoprecipitačního experimentu je třeba zvážit: výběr formátu metody, vazebné proteiny a kuličky, výběr správné primární protilátky a izotypu a negativní kontrola.
Co je koimunoprecipitace?
Koimunoprecipitace je technika vysrážení intaktních proteinových komplexů z roztoku pomocí specifické protilátky. Koimunoprecipitace obecně funguje tak, že se vybere specifická protilátka, která cílí na známý protein (antigen), o kterém se předpokládá, že je členem většího komplexu proteinů. Zacílením na známý člen specifickou protilátkou je možné vytáhnout celý proteinový komplex z roztoku. To umožňuje identifikaci neznámých členů komplexu. Koncept vytahování proteinových komplexů z roztoku se někdy nazývá „stahovací“mechanismus.
Obrázek 02: B Koimunoprecipitace
Koimunoprecipitace je výkonná technika, která se používá k analýze interakcí protein-protein. Hlavním účelem koimunoprecipitace je identifikace interagujících partnerů, jako jsou ligandy, kofaktory nebo signální molekuly k proteinu zájmu. Kromě toho je koimunoprecipitace účinnou technikou, která se používá k separaci proteinů ze séra, buněčného lyzátu, homogenizované tkáně nebo kondicionovaného média.
Jaké jsou podobnosti mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací?
- Imunoprecipitace a koimunoprecipitace jsou dva typy technik založených na srážecí reakci.
- Obě techniky lze použít k identifikaci cílového antigenu prostřednictvím specifické protilátky.
- Obě techniky silně závisí na interakci antigen-protilátka.
- Běžně se používají v klinických laboratořích.
Jaký je rozdíl mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací?
Imunoprecipitace je technika, která vysráží protein z roztoku pomocí specifické protilátky, zatímco koimunoprecipitace je technika, která vysráží intaktní proteinové komplexy z roztoku pomocí specifické protilátky. Toto je klíčový rozdíl mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací. Dále se v laboratořích častěji používá imunoprecipitace, zatímco koimunoprecipitace se v laboratořích běžně nepoužívá.
Níže uvedená infografika představuje rozdíly mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací v tabulkové formě pro srovnání vedle sebe.
Shrnutí – Imunoprecipitace vs Koimunoprecipitace
Imunoprecipitace a koimunoprecipitace jsou dva typy technik založených na precipitační reakci, které závisí na interakci antigen-protilátka. Technika imunoprecipitace vysráží protein z roztoku pomocí specifické protilátky, zatímco technika koimunoprecipitace vysráží intaktní proteinové komplexy z roztoku pomocí specifické protilátky. Toto shrnuje rozdíl mezi imunoprecipitací a koimunoprecipitací.
